Résumé: L'utilisation de solutions de lavage oculaire au Japon, en particulier chez les patients atteints de conjonctivite allergique et porteurs de lentilles de contact, a augmenté. Notre objectif était d'étudier comment l'utilisation d'une solution de lavage oculaire sans conservateur dans des yeux sains pendant un mois affecte la sécurité cornéenne et la mucine de la surface oculaire..
Nous avons analysé 42 les yeux de 21 personnes (17 mâles, quatre femelles; âge moyen: 36.1 ± 7.4 années) sans pour autant
allergies oculaires, yeux secs, ou d'autres maladies oculaires par une étude prospective. Les yeux ont été randomisés dans un groupe de lavage (groupe un) et un groupe de suivi non-lavage (groupe deux). Nous avons évalué le score de qualité de vie lié à la sécheresse oculaire (DEQS), temps de rupture du film lacrymal (TBUT), score de coloration à la fluorescéine,Expression de l'ARNm de MUC5AC et MUC16, Immunohistochimie MUC16, et acide periodique MUC5AC Schiff (PAS) coloration. Il y avait une diminution significative des scores DEQS après un mois d'utilisation de la douche oculaire (p < 0.05). Il n'y avait pas de différences significatives dans les autres éléments d'évaluation qui ont été analysés (tout p > 0.05). en outre, aucune différence significative n'a été observée entre le groupe un et le groupe deux pour tous les critères d'évaluation (tout p > 0.05). Les résultats suggèrent qu'un mois d'utilisation d'une solution de lavage oculaire sans conservateur n'a aucun effet néfaste sur le film lacrymal et les mucines de la surface oculaire..
Mots clés: collyre; mucine; MUC5AC; MUC16
1. introduction
L'utilisation de solutions de lavage oculaire au Japon, en particulier chez les patients atteints de conjonctivite allergique et de contact
porteurs de lentilles, a augmenté. Un type de tasse lavage des yeux solution, Eyebon® (Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd.; Osaka, Japon) a été lancé en 1995 déclenchant une large reconnaissance des solutions de lavage oculaire. Dans le passé, les solutions de lavage oculaire contenaient des conservateurs (chlorure de benzalkonium [BAC]) jusqu'à 2002. Des troubles de l'épithélium cornéen associés à l'utilisation de collyres ont été signalés [1]. Actuellement, les solutions de lavage oculaire sans conservateur sont devenues populaires. Nous avons déjà rapporté la sécurité oculaire des solutions de lavage oculaire sans conservateur pour la conjonctivite allergique [2,3]. de plus, problèmes causés par les douches oculaires commerciales, par exemple, infection et yeux secs, n'ont pas encore été signalés, toutefois, de nombreux médecins craignent que le lavage des yeux puisse altérer la structure de la mucine dans le film lacrymal et favoriser l'infection et la kératoconjonctivite épithéliale.
Selon les directives japonaises pour les maladies conjonctivales allergiques [4], l'utilisation de solutions de lavage oculaire n'est pas recommandée en raison du risque de contamination cutanée autour des yeux et d'introduction d'antigènes de la peau vers la surface oculaire, toutefois, ces affirmations n'ont pas été prouvées. Les effets de l'utilisation à long terme de la douche oculaire sur la surface oculaire n'ont pas été étudiés jusqu'à présent.
On pense que les mucines de la surface oculaire fournissent une barrière pour empêcher les agents pathogènes et les particules de pénétrer dans l'épithélium de la surface oculaire et leur forte glycosylation liée à l'O maintient l'hydratation de la surface oculaire et la stabilité des larmes. [5]. Il a été rapporté que quatre sous-types de mucines sécrétées (MUC2, MUC5AC, MUC7, et MUC19) et quatre types de mucines associées à la membrane (MUC1, MUC4, MUC16, et MUC20) s'expriment sur la surface oculaire [6]. MUC5AC est une mucine gélifiante sécrétée par les cellules caliciformes conjonctivales et elle est exprimée principalement sur la surface oculaire. L'expression de MUC16 dans le glycocalyx de la surface oculaire aide à fournir une barrière protectrice non adhésive pour la surface épithéliale [7]. Nous avons signalé que les niveaux d'expression de MUC5AC diminuaient significativement dans les cellules épithéliales conjonctivales chez les patients atteints de kératoconjonctivite atopique., une maladie conjonctivale allergique sévère, alors que l'expression de MUC16 était régulée positivement [8], toutefois, les effets du collyre sur la stabilité de la mucine et des larmes n'ont pas été entièrement compris et élucidés.
Dans cette étude, nous avons étudié l'effet sur la sécurité cornéenne et la mucine de la surface oculaire (MUC5AC et MUC16) après utilisation d'un collyre sans conservateur dans des yeux sains pendant un mois
2. Résultats
2.1. Modifications du score de qualité de vie lié à la sécheresse oculaire (DEQS) Scores avec l'utilisation de la douche oculaire Le score DEQS moyen au départ était de 16.0 ± 12.9, et un mois après le traitement de la douche oculaire, il était 4.6 ± 5.7 dans le premier groupe et 7.9 ± 10.6 dans le groupe deux. Il y avait une diminution significative après un mois d'utilisation de la douche oculaire (p = 0.001), alors que dans le groupe 2, il n'y avait pas de différence significative entre le départ et un mois plus tard. (p > 0.05) (Chiffre 1)
Chiffre 1. Modifications du score de qualité de vie lié à la sécheresse oculaire (DEQS) score. Notez l'importance
amélioration entre avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire (p = 0.001).
2.2. Modifications des scores TBUT et de coloration de la surface oculaire
Chiffre 2 montre les changements du TBUT un mois après l'utilisation de la douche oculaire. Le TBUT moyen à
la ligne de base n'a montré aucune différence significative entre les groupes (groupe un: 8.07 ± 3.08 s, groupe deux:
7.69 ± 2.14 s; p > 0.05). De la même manière, il n'y avait pas de différence significative un mois après le début du
traitement de collyre (groupe un: 7.76 ± 2.15 s, groupe deux: 7.66 ± 2.30 s; p > 0.05). Dans les comparaisons au sein des sous-groupes, il n'y a pas eu de détériorations significatives après un mois (à la fois groupe un et
groupe deux; p > 0.05)
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Chiffre 2. Modifications du temps de rupture du film lacrymal (TBUT). Notez les changements TBUT non significatifs entre avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire (p > 0.05).
Aucun des objets n'avait de coloration cornéenne et conjonctivale avant et après un mois d'utilisation de la douche oculaire.
2.3. Modifications des niveaux d'expression de l'ARNm MUC5AC et MUC16
Chiffre 3
montre les niveaux d'expression de l'ARNm MUC5AC et MUC16. Pour MUC5AC, il n'y a pas eu de diminution significative du nombre de copies/ng d'ARN (GAPDH) à partir de la ligne de base (groupe un: 0.02 ± 0.03, groupe deux: 0.03 ± 0.05) à un mois après le début de l'utilisation de la douche oculaire (groupe un: 0.02 ± 0.03 groupe deux: 0.03 ± 0.03) (p > 0.05). de plus, aucune différence significative dans l'expression de l'ARNm de MUC5AC entre les yeux lavés et non lavés après un mois n'a été observée (p > 0.05). Pour MUC16, il n'y a pas eu de diminution significative du nombre de copies/ng d'ARN (GAPDH) à partir de la ligne de base (groupe un: 0.29 ± 0.10, groupe deux: 0.31 ± 0.18) à un mois après le début de l'utilisation de la douche oculaire (groupe un: 0.33 ± 0.19 groupe deux: 0.33 ± 0.24) (p > 0.05). en outre, aucune différence significative dans l'expression de l'ARNm de MUC16 entre les yeux lavés et non lavés après un mois n'a été observée (p > 0.05).
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Chiffre 3. Changements dans les expressions d'ARNm de MUC5AC et MUC16. Notez le MUC5AC non significatif
et le niveau d'expression de l'ARN MUC16 change entre avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire (p > 0.05):
(UNE) MUC5AC et (B) MUC16.
2.4. Modifications de la coloration immunohistochimique MUC16
Chiffre 4 montre la coloration immunohistochimique MUC16 représentative avant et après un
mois d'utilisation de la douche oculaire dans chaque groupe. Coloration immunohistochimique des empreintes conjonctivales
des yeux ont montré une coloration positive similaire pour MUC16. Les ratios des zones colorées avec MUC16
les anticorps contre les zones globales des cellules épithéliales conjonctivales n'ont pas montré de différences significatives au départ (groupe un: 1.5 ± 1.3%, groupe deux: 2.9 ± 3.3%) et un mois après l'utilisation de la douche oculaire (groupe un: 2.0 ± 1.9 %, groupe deux: 2.3 ± 1.7%) (p > 0.05)(Chiffre 5)
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.Chiffre 4. Coloration immunohistochimique MUC16 représentative. Notez la coloration MUC16 positive avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire (Flèches rouges): (UNE) ligne de base dans le groupe un; (B) après 1 mois dans le groupe un; (C) ligne de base dans le groupe deux; et (ré) après 1 mois dans le groupe deux.
Chiffre 5. Rapport des zones colorées avec des anticorps MUC16 à la zone globale de prélèvement cellulaire. Noter la
changements non significatifs de coloration des anticorps MUC16 entre avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire
(p > 0.05)
2.5. Modifications de la coloration MUC5AC PAS et de la densité des cellules caliciformes
Chiffre 6 montre le schiff d'acide périodique MUC5AC représentatif (PAS) coloration avant et après
un mois d'utilisation de la douche oculaire dans chaque groupe. La coloration PAS des empreintes conjonctivales des yeux a montré
coloration positive pour de nombreux MUC5AC + les cellules caliciformes et les zones de mucine sont récupérées avec des feuilles
de cellules épithéliales conjonctivales saines. Chiffre 7 montre les comparaisons de la cellule caliciforme conjonctivale
densité entre le groupe un et le groupe deux au départ (groupe un: 14.1 ± 23.6 cellules/hpf, groupe deux:
18.0 ± 18.7 cellules/hpf) et un mois après le lavage des yeux (groupe un: 15.3 ± 15.0 cellules/hpf, groupe deux:
18.5 ± 12.6 cellules/hpf). Il n'y avait pas de différences significatives par rapport à la fois à l'intérieur du sous-groupe et
variations inter-sous-groupes (tout p > 0.05
Chiffre 6. Coloration MUC5AC PAS représentative. Notez les nombreux MUC5AC + cellules caliciformes avant
et après 1 mois de collyre (flèches noires): (UNE) ligne de base dans le groupe un; (B) après 1 mois dans le groupe un;
(C) ligne de base dans le groupe deux; et (ré) après 1 mois dans le groupe deux
Chiffre 7. Numération des cellules caliciformes dans l'acide périodique Schiff (PAS) coloration. Notez les changements non significatifs dans
nombre de cellules caliciformes entre avant et après 1 mois d'utilisation de la douche oculaire (p > 0.05)
3. Discussion
dans cette étude, nous avons constaté qu'une solution de lavage oculaire sans conservateur n'avait aucun effet indésirable sur les yeux
mucines de surface, MUC5AC, et MUC16 et n'a pas induit de dommages épithéliaux. Nous avons précédemment
ont rapporté que le collyre est efficace pour éliminer les allergies et les corps étrangers [2]. en outre,
cette étude montre que le collyre n'altère pas significativement la stabilité des larmes sur la surface oculaire.
Iwashita et al. ont rapporté que les yeux avec Eyebon® wash avaient significativement moins de fluorescéine et de lissamine
scores de coloration verte par rapport à la solution saline physiologique contenant du BAK [3]. Leur
les résultats ont indiqué que le BAK pouvait aggraver les maladies oculaires telles que les yeux secs et les ponctuations superficielles
kératite (SPK). Donc, la recherche sur la sécrétion de mucine et les cellules sécrétant de la mucine peut fournir des informations inestimables et de nouvelles perspectives pour la prise en charge des troubles de la surface oculaire, notamment la sécheresse oculaire. Une altération des expressions de la mucine associée à la membrane et de la sécrétion de mucine formant un gel par les cellules caliciformes a été notée dans les maladies de la surface oculaire, y compris la sécheresse oculaire, qui est une raison courante et majeure des visites dans les cliniques ophtalmologiques.. Il est rapporté que 7,4 à 33,4% de la population mondiale a reçu un diagnostic de sécheresse oculaire (560 millions à 2.54 milliards de malades) [10,11] La sécheresse oculaire se caractérise par la perte de volume des larmes, rupture rapide du film lacrymal, et évaporation des larmes. Il est proposé que le TBUT soit l'une des principales conclusions objectives dans le diagnostic de la sécheresse oculaire, et il induit une baisse des performances visuelles et de la qualité optique [11].
En raison de l'incidence accrue de cette maladie en Asie, les critères diagnostiques de la sécheresse oculaire ont été renouvelés par l'Asia Dry Eye Society [12].
Les critères renouvelés mettent en évidence le rôle essentiel de l'évaluation du TBUT et définissent le TBUT comme le phénotype objectif le plus important chez les patients souffrant de sécheresse oculaire. Bien que l'anomalie de la mucine soit l'une des causes de la diminution du TBUT (film lacrymal instable) et est commun, il est rarement évalué de façon routinière dans le cadre de la pratique clinique [9]. Dans cette étude, les patients étaient relativement jeunes et les patients souffrant de sécheresse oculaire ont été exclus. Selon Farrand et al., la prévalence de la sécheresse oculaire augmentait avec l'âge et était plus élevée chez les femmes que chez les hommes [13]. Donc, les différences liées à l'âge et au sexe en ce qui concerne les modifications de la surface oculaire avec le lavage oculaire devraient être élucidées à l'avenir. Eyebon® contient du sulfate de chondroïtine sodique, qui a un effet protecteur sur la cornée, et glycyrrhizinate dipotassique, qui a un effet anti-inflammatoire. Le sulfate de chondroïtine sodique s'est également révélé efficace dans le traitement des défauts épithéliaux cornéens et de la kératite ulcéreuse chez des modèles animaux [14].
Shimazaki-Den et al. ont rapporté que les niveaux d'expression de MUC5AC dans l'épithélium conjonctival étaient significativement plus faibles chez les patients souffrant de sécheresse oculaire [15]. Argueso et al.. ont rapporté que l'expression de MUC5AC était significativement plus faible dans le liquide lacrymal et les cellules épithéliales conjonctivales chez les patients atteints du syndrome de Sjögren par rapport aux individus normaux [16].
Les effets de l'utilisation de solutions de lavage oculaire sur les yeux atteints de telles maladies et de faibles niveaux d'expression de mucine devraient être étudiés prochainement. Cela pourrait fournir des informations intéressantes. Si le microenvironnement de la surface oculaire chez ces patients est différent de celui des personnes en bonne santé, on ne peut nier que la mucine est diminuée. Donc, dans la présente étude, nous avions l'intention d'étudier uniquement les personnes en bonne santé, puis les patients atteints de maladies oculaires à l'avenir, toutefois, il y a des considérations éthiques au Japon, et donc c'est un problème futur. Eyebon® est ajouté comme régulateur de pH car il peut être ajusté au même pH que la déchirure pour éviter une sensation de brûlure. Nous ne pouvons pas nier la possibilité que des excipients tels que le polysorbate 80, l-menthol, et le dl-camphre peut également avoir une activité de lésions épithéliales telles que BAK, mais nous ne l'avons pas évalué dans cette étude. Donc, une étude plus approfondie pour déterminer si des troubles de l'épithélium cornéen peuvent être causés par des excipients est nécessaire.
Cette étude n'a montré aucun changement significatif dans les évaluations objectives (TBUT et coloration de la surface oculaire) avant et après le lavage des yeux, tandis que l'évaluation subjective (DEQS) s'était considérablement amélioré après le lavage des yeux. Parce que la sécheresse oculaire est diagnostiquée par un combinaison des symptômes subjectifs et une diminution du TBUT [12] au Japon, nos résultats suggèrent que la possibilité d'exacerber les conditions de sécheresse oculaire par le collyre peut être très faible, toutefois, si le score DEQS s'améliore après lavage oculaire, la possibilité ne peut pas être exclue qu'il puisse y avoir un biais qui rend l'œil non traité plus inconfortable. Donc, pour fournir plus d'indices par rapport à la fonction lacrymale et aux changements de la surface oculaire, nous avons également effectué une analyse de cytologie d'impression. Les expressions MUC5AC et MUC16 n'ont pas connu de changements significatifs entre le départ et un mois après le début de l'utilisation de la douche oculaire. Dans les rapports des zones colorées avec des anticorps MUC16 aux zones de cellules épithéliales conjonctivales, Coloration PAS des empreintes conjonctivales, et cellules caliciformes MUC5AC plus, il n'y avait pas de différences significatives entre avant et après le lavage des yeux. Précédemment, nous avons signalé que les expressions d'ARNm de MUC5AC et les densités de cellules caliciformes montraient une réduction drastique chez les patients atopiques atteints d'une maladie épithéliale sévère [17]. en outre, de nombreuses colorations PAS positives pour les mucines dans les échantillons de cytologie d'impression pour les yeux présentant une maladie épithéliale importante et des ulcères cornéens ont été trouvées. En revanche, mucines non caliciformes (par exemple,, MUC1, 2, 4, et 16) Les expressions d'ARNm étaient toutes significativement régulées à la hausse dans les yeux atteints d'une maladie épithéliale importante par rapport aux yeux témoins sains [8]. Donc, les cellules épithéliales de la surface oculaire pourraient sécréter d'autres mucines pour compenser la diminution de MUC5AC et protéger la surface oculaire. demandez à d'autres autour de vous de contacter votre médecin pour vous pendant que vous vous concentrez sur le rinçage de vos yeux, il est important d'évaluer la présence ou l'absence de troubles de l'épithélium cornéen avant de commencer à utiliser une douche oculaire, et nous étudierons les mucines autres que MUC5AC et MUC16 et l'efficacité de l'utilisation de la douche oculaire chez les patients atteints de dermatite atopique à l'avenir
Dans le traitement de la conjonctivite allergique saisonnière (SAC) et conjonctivite allergique perannuelle (CAP), antihistaminiques topiques, stabilisateurs de mastocytes, les anti-inflammatoires non stéroïdiens, et les stéroïdes sont généralement utilisés, toutefois, nous rencontrons parfois des patients réfractaires à ces médicaments. Bien que des stéroïdes supplémentaires puissent être nécessaires pour soulager les symptômes du patient, ils peuvent provoquer des effets indésirables tels que la cataracte, infection, élévation de la pression intraoculaire induite par les stéroïdes (PIO), glaucome, atrophie cutanée des paupières, et dépigmentation avec troubles de la barrière [18–20]. Pour surmonter ces problèmes, des médicaments thérapeutiques supplémentaires ou alternatifs ont été nécessaires. améliorer l'efficacité et réduire la consommation de fonction, une douche oculaire a été utilisée chez des patients avec SAC ou PAC. Dans le passé, nous avons rapporté que l'effet antiprurigineux durait significativement jusqu'à 20 min après avoir lavé les yeux [2]. Nous pensons que le traitement par collyre est principalement efficace pour les réactions de phase précoce provoquées par une libération aiguë d'histamine en ce qu'il contient un antihistaminique, maléate de chlorphéniramine. de plus, l'effet du collyre sur les symptômes allergiques aigus devrait également être dû à l'élimination mécanique de l'allergène de la surface oculaire par lavage, toutefois, les patients ont tendance à se frotter les yeux après cela. Pollinose cutanée des paupières (dermatite pollinique ou blépharite pollinique) a été rapporté suggérant que l'adhésion des pollens à la peau fine et douce des paupières induit facilement une allergie cutanée [21,22]. Étant donné que les démangeaisons se produisent dans la peau des paupières plutôt que dans le globe oculaire, l'instillation oculaire peut ne pas être aussi efficace que l'utilisation de la douche oculaire chez ces patients. Un traitement de la paupière peut être nécessaire pour ces patients [23,24] et les solutions de collyre peuvent être l'une des méthodes de traitement ou de prévention des démangeaisons sans aucune réaction indésirable aux médicaments. Bien qu'il s'agisse d'une étude d'un mois, la douche oculaire peut être utilisée pendant une période plus longue dans le traitement des SAA. en outre, les porteurs de lentilles de contact ont été exclus de cette étude, mais nous devrions également étudier l'efficacité et la sécurité de la douche oculaire chez les porteurs de lentilles de contact. Donc, nous devrions envisager une étude future plus approfondie sur ce sujet. Les résultats de cette étude suggèrent qu'un mois d'utilisation d'une solution de lavage oculaire sans conservateur n'a pas d'effets indésirables sur le film lacrymal et les mucines de la surface oculaire..
4. Matériaux et méthodes 4.1. Conception de l'étude et informations sur le patient Cette étude a adhéré aux principes de la Déclaration d'Helsinki. Toutes les procédures ont été réalisées conformément au protocole (#610) approuvé par le comité d'éthique institutionnel de l'École de médecine dentaire de l'Université de Tsurumi. Un consentement éclairé écrit a été obtenu de tous les patients. Nous avons réalisé une prospective, étude contrôlée controlatérale à la clinique externe du service d'ophtalmologie, Hôpital universitaire de Tsurumi. Un total de 42 les yeux dans 21 personnes (17 mâles, 4 femelles; âge moyen: 36.1 ± 7.4 années) sans allergies oculaires, yeux secs, ou d'autres maladies oculaires ont été analysées. Les yeux ont été randomisés dans un groupe de lavage (groupe un, n = 21) et un groupe de suivi sans lavage (groupe deux, n = 21). Les éléments d'évaluation suivants au départ et après 1 mois ont été comparés pour analyser la variation intra-sous-groupe et la variation inter-sous-groupe; DEQS, film lacrymal MAIS, score de coloration à la fluorescéine, Expression de l'ARNm de MUC5AC et MUC16 dans la conjonctive, Immunohistochimie MUC16 pour le rapport des zones colorées à la zone globale de prélèvement cellulaire, et coloration MUC5AC PAS pour le comptage de la densité des cellules caliciformes (Table 1).
Les patients qui avaient au moins un des éléments suivants 11 les problèmes ont été exclus. Les patients avec:
(1) des antécédents d'hypersensibilité allergique ou d'hypersensibilité connue à tout composé ou excipient de l'Eyebon®,
(2) toute condition oculaire qui pourrait affecter leur sécurité ou les paramètres de l'étude (glaucome à angle fermé nécessitant des médicaments ou un traitement au laser, blépharite cliniquement significative, conjonctivite folliculaire, iritis, ptérygion, ou un diagnostic de sécheresse oculaire),
(3) des antécédents de kératoconjonctivite vernale ou de kératoconjonctivite atopique,
(4) intervention chirurgicale oculaire le passé 3 mois avant ou chirurgie réfractive dans le passé 6 mois avant les études,
(5) une présence d'infection oculaire active (bactérien, viral, ou fongique) ou lymphadénopathie préauriculaire, ou une infection herpétique oculaire,
(6) toute maladie systémique non contrôlée,
(7) un antécédent d'état de mal asthmatique, asthme persistant modéré ou sévère, ou réactions asthmatiques allergiques modérées à sévères aux allergènes de l'étude,
(8) signes ou symptômes manifestés de conjonctivite allergique cliniquement active (défini comme la présence de démangeaisons ou >1 hyperémie dans le lit du vaisseau conjonctival) dans les deux yeux lors de leur première visite. Les patients qui
(9) êtes actuellement enceinte, allaitement, ou planifier une grossesse,
(10) porter des lentilles de contact,
(11) avoir utilisé des médicaments (topique, ophtalmique topique, systémique ou injectable) pendant la période indiquée avant et pendant la période d'études. Ceux-ci comprenaient de l'aspirine, de l'aspirine contenant des produits, Antihistaminiques antagonistes H1 (y compris oculaire), et toutes les autres thérapies anti-allergiques, qui comprennent des ordonnances, hors cote, agents d'homéopathie, toutes les autres préparations ophtalmiques topiques (y compris les substituts lacrymaux) autre que les gouttes d'étude, corticostéroïdes ou stabilisateurs de mastocytes, et corticostéroïdes retard.
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4.2. Eyebon®
Eyebon® est une solution de lavage oculaire commerciale utilisée dans les expérimentations animales et les examens cliniques humains, qui peut être utilisé, jusqu'à six fois/jour, sur la base des normes d'agrément de fabrication et de commercialisation des médicaments en vente libre (OTC) drogues. Le lavage doit avoir lieu pendant ≤ 30 s par administration sur la base d'un rapport sur les troubles de l'épithélium cornéen [1]. Premièrement, les cosmétiques et les taches autour des yeux ont été essuyés avant utilisation. Deuxièmement, la solution a été versée, jusqu'à 5 mL, dans le gobelet de douche oculaire attaché, et pressé fermement contre l'œil. Pour terminer, tout en appuyant la tasse sur l'œil, le patient face vers le haut en posant la tête en arrière en prenant soin de ne pas renverser la solution, et l'œil a été lavé avec plusieurs clignements. Il existe de nombreux types d'Eyebon®; nous avons utilisé la « vitamine Eyebon® W ». La solution ne contient pas de BAK, mais les ingrédients actifs suivants (dans 100 mL): Glycyrrhizinate dipotassique 25 mg, maléate de chlorphéniramine 3 mg, taurine 100 mg, le chlorhydrate de pyridoxine (vitamine B6) 10 mg, cyanocobalamine (vitamine B12) 1 mg, et sulfate de chondroïtine sodique 10 mg. Les excipients suivants sont également inclus (dans 100 mL): acide borique, borax, polysorbate 80, édétate de sodium, propylène glycol, l-menthol, dl-camphre, et régulateur de pH.
4.3. Questionnaire
Le score DEQS est un questionnaire japonais validé spécifique à la sécheresse oculaire qui a été utilisé pour évaluer les symptômes et leurs effets sur la qualité de vie (Qualité de vie) chez les individus japonais [25]. Le DEQS est composé de 15 éléments liés aux symptômes de sécheresse oculaire et influence sur la vie quotidienne, et le degré global d'altération de la qualité de vie est calculé sous la forme d'un score récapitulatif de 0 à 100 points.
4.4. Tests de la fonction lacrymale et coloration de la surface oculaire
Nous avons évalué le TBUT et les scores de coloration cornéenne et conjonctivale à la fluorescéine avant et après l'étude, comme indiqué précédemment [26,27]. Le score TBUT a été mesuré avec des observations de la cornée et de la conjonctive à travers une lampe à fente après instillation d'un 2 µL de solution de fluorescéine dans le sac conjonctival. Le temps entre un clignement normal et la première apparition d'une tache sèche dans le film lacrymal a été mesuré. La coloration de la surface oculaire à la fluorescéine a été réalisée avec un filtre barrière sans bleu. La surface oculaire a été divisée en trois zones suivantes: la conjonctive bulbaire nasale, la cornée,
et la conjonctive bulbaire temporale. Le score de coloration maximum pour chaque zone était 3 points, et le score de coloration maximal pour l'ensemble de la surface était 9 points.
4.5. Cytologie par empreinte conjonctivale
Les échantillons de cytologie d'impression ont été obtenus après l'administration d'une anesthésie topique avec 0.4% oxybuprocaïne. Trois bandes séparées de papier filtre en acétate de cellulose (Millipore HAWP 304, Bedford, MA, Etats-Unis) qui avait été trempé dans de l'eau distillée pendant quelques heures et séché à température ambiante (25 ◦C) ont été appliqués sur le temporal supérieur, temporal inférieur, et conjonctive bulbaire nasale inférieure. Ces zones ont été pressées doucement par une tige de verre puis retirées (Chiffre 8). Les échantillons ont ensuite été fixés avec du formaldéhyde. Int. J. Môle. SCI. 2019, 20, x POUR L'ÉVALUATION PAR LES PAIRS 9 de 12 4.5. Empreinte conjonctivale
Cytologie
Les échantillons de cytologie d'impression ont été obtenus après l'administration d'une anesthésie topique avec 0.4% oxybuprocaïne. Trois bandes séparées de papier filtre en acétate de cellulose (Millipore HAWP 304, Bedford, MA, Etats-Unis) qui avait été trempé dans de l'eau distillée pendant quelques heures et séché à température ambiante (25 ° C) ont été appliqués sur le temporal supérieur, temporal inférieur, et conjonctive bulbaire nasale inférieure. Ces zones ont été pressées doucement par une tige de verre puis retirées (Chiffre 8). Les échantillons ont ensuite été fixés avec du formaldéhyde.
Les échantillons de la conjonctive bulbaire temporale supérieure étaient destinés à la PCR de MUC5AC et MUC16. Les échantillons de conjonctive bulbaire temporale inférieure ont été affectés à une coloration immunohistochimique pour confirmer la présence de MUC16. Les spécimens de la conjonctive bulbaire nasale inférieure ont été colorés avec PAS pour MUC5A
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Chiffre 8. Domaines de la cytologie d'impression:
(UNE) conjonctive bulbaire supérieure pour RT-PCR de MUC5AC et MUC16,
(B) conjonctive bulbaire temporale inférieure pour immunohistochimie MUC16, et
(C) conjonctive bulbaire nasale inférieure pour coloration MUC5AC PAS. 4.6. PCR quantitative en temps réel pour l'expression de l'ARNm MUC5AC et MUC16 L'ARN a été extrait des échantillons d'isogènes. Une qRT-PCR a été réalisée selon les instructions du fabricant (Biosystèmes appliqués, Weiterstadt, Allemagne). L'ADNc (10 ng) a été amplifié en 30 μL volume final en présence de 1.2 μL des oligonucléotides « Assay by Design » (MUC5AC et MUC16 et GAPDH; Biosystèmes appliqués). Les ensembles d'amorces et de sondes de gène de test ont été optimisés pour la concentration, efficacité d'amplification, et co-amplification fidèle avec une amorce de gène domestique et des ensembles de sondes, ce dernier incluant le GAPDH. Une qRT-PCR a été mise en place 96- plaques à puits en utilisant les réactifs ci-dessus et le mélange maître TaqMan et comme indiqué par les données d'optimisation et il a été exécuté sur 7000 Thermocycleurs ABI (Biosystèmes appliqués). Le profil thermique consistait en 50 °C pour 2 moi, 95 °C pour 2 moi, suivie par 40 cycles de 95 °C pour 15 seconde et 60 ° C 30 s. Les données en temps réel ont été acquises et analysées à l'aide du logiciel de système de détection de séquence (Biosystèmes appliqués) avec réglage manuel des paramètres de ligne de base et de seuil. Les niveaux d'expression de l'ARNm ont été normalisés par l'expression médiane d'un gène domestique (GAPDH). Les séquences d'amorces de PCR en temps réel sont présentées dans le tableau 2.
4.7. Coloration immunohistochimique pour MUC16
Les échantillons de cytologie d'impression pour la coloration immunohistochimique MUC16 ont été placés dans des cassettes d'enrobage fenêtrées en plastique (Murazumi, Osaka, Japon). Ensuite, ils ont été immergés dans des bocaux en verre contenant 10 mM de tampon citrate de sodium (pH 6.0) et ont été soumis à un traitement aux micro-ondes à 500 W pour 5 min pour activer l'antigène. Les échantillons ont ensuite été lavés dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) deux fois pour 5 moi. Les échantillons ont été placés sur des lames et bloqués dans 5 ml de PBS avec
2 gouttes d'albumine sérique de cheval pour 20 moi. Les anticorps monoclonaux primaires de souris MUC16 à une dilution de 1:50 (PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, Allemagne) ont été sollicités 24 h à la pièce Figure 8. Domaines de la cytologie d'impression: (UNE) conjonctive bulbaire supérieure pour RT-PCR de MUC5AC et MUC16, (B) conjonctive bulbaire temporale inférieure pour immunohistochimie MUC16, et (C) conjonctive bulbaire nasale inférieure pour coloration MUC5AC PAS. Les échantillons de la conjonctive bulbaire temporale supérieure étaient destinés à la PCR de MUC5AC et MUC16. Les échantillons de conjonctive bulbaire temporale inférieure ont été affectés à une coloration immunohistochimique pour confirmer la présence de MUC16. Les échantillons de la conjonctive bulbaire nasale inférieure ont été colorés au PAS pour MUC5AC, déshydraté dans des grades croissants d'éthanol puis avec du xylol, et enfin la couverture a glissé. 4.6. PCR quantitative en temps réel pour l'expression d'ARNm MUC5AC et MUC16
L'ARN a été extrait des échantillons d'isogène. Une qRT-PCR a été réalisée selon les instructions du fabricant (Biosystèmes appliqués, Weiterstadt, Allemagne). L'ADNc (10 ng) a été amplifié en 30 Volume final µL en présence de 1.2 µL des oligonucléotides « Assay by Design » (MUC5AC et MUC16 et GAPDH; Biosystèmes appliqués). Les ensembles d'amorces et de sondes de gène de test ont été optimisés pour la concentration, efficacité d'amplification, et co-amplification fidèle avec une amorce de gène domestique et des ensembles de sondes, ce dernier incluant le GAPDH. Un qRT-PCR a été mis en place dans des plaques à 96 puits en utilisant les réactifs ci-dessus et le mélange maître TaqMan et comme indiqué par les données d'optimisation et il a été exécuté sur 7000 Thermocycleurs ABI (Biosystèmes appliqués). Le profil thermique consistait en 50 ◦C pour 2 moi, 95 ◦C pour 2 moi, suivie par 40 cycles de 95 ◦C pour 15 seconde et 60 ◦C 30 s. Les données en temps réel ont été acquises et analysées à l'aide du logiciel de système de détection de séquence (Biosystèmes appliqués) avec réglage manuel des paramètres de ligne de base et de seuil. Les niveaux d'expression de l'ARNm ont été normalisés par l'expression médiane d'un gène domestique (GAPDH). Les séquences d'amorces PCR en temps réel sont présentées dans le tableau 2 ————————————————————– 4.7. Coloration immunohistochimique pour MUC16
Les échantillons de cytologie d'impression pour la coloration immunohistochimique MUC16 ont été placés dans des cassettes d'enrobage fenêtrées en plastique (Murazumi, Osaka, Japon). Ensuite, ils ont été immergés dans des bocaux en verre contenant 10 mM de tampon citrate de sodium (pH 6.0) et ont été soumis à un traitement aux micro-ondes à 500 W pour 5 min pour activer l'antigène. Les échantillons ont ensuite été lavés dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) deux fois pour 5 moi. Les échantillons ont été placés sur des lames et bloqués dans 5 ml de PBS avec 2 gouttes d'albumine sérique de cheval pour 20 moi. Les anticorps monoclonaux primaires de souris MUC16 à une dilution de 1:50 (PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, Allemagne) ont été sollicités 24 h à température ambiante (25 ◦C) en chambre humide puis les lames sont rincées au PBS 3 fois pour 5 moi. Les échantillons ont été traités à l'aide du kit VECTASTAIN ABC (DAKO, Co, Carpinteria, Californie, Etats-Unis) protocole (3,30 coloration au peroxyde de diaminobenzidine). En bref, les spécimens ont été développés avec 0.025% 3,30 diaminobenzidine (Sigma chimique, Co, St. Louis, MO, Etats-Unis) melanger avec 0.3% H2O2, et contre-coloré à l'hématoxyline. Déshydratation par immersion dans des solutions successivement plus concentrées d'alcool éthylique, suivi d'une immersion dans le xylène pendant une nuit. Pour terminer, les échantillons ont été transférés dans des flacons en verre et recouverts d'un milieu de montage pour un examen au microscope optique. L'évaluation des échantillons au microscope optique pour la présence d'une coloration immunohistochimique positive a également été réalisée de manière masquée
4.8. Schiff d'acide périodique MUC5AC (PAS) Coloration pour la densité des cellules caliciformes
Les études quantitatives des cellules caliciformes conjonctivales ont été réalisées en prenant des photographies à l'aide d'une grille calibrée sous un microscope optique à un grossissement de 400×. Nous avons photographié trois zones non superposées de chaque échantillon sélectionné au hasard et avons moyenné les résultats pour un seul score d'échantillon. Les comptages de densité de cellules caliciformes ont été rapportés en tant que cellules par champ de haute puissance (GC/HPF). Le même chercheur qui a été apparié à qui provenaient les échantillons a évalué les échantillons pour le nombre de cellules caliciformes et la collecte de mucine. 4.9. Analyses statistiques
Les données ont été analysées à l'aide du logiciel Prism (voir. 8.1.0 pour Mac; Logiciel GraphPad Inc, San Diego, Californie, Etats-Unis) et Excel pour Mac (voir. 16.16.11; Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Etats-Unis). Comparer les différences de paramètres oculaires cliniques entre les groupes, un test t apparié a été utilisé. Toutes les données ont été exprimées en moyenne ± écart type (Dakota du Sud). Une valeur p < 0.05 a été considéré comme indiquant une signification statistique.
Les contributions de l'auteur: MARYLAND. et HF. conçu et conçu les expériences; MARYLAND., COMME., et HF. mené les expériences; H. Y., N. K., MARYLAND., et HF. analysé les résultats; HY. et MD. écrit le manuscrit; Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.
Financement: Cette étude a été parrainée et financée par Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd.—Le bailleur de fonds n'a joué aucun rôle dans la conception de l'étude; dans la collecte, analyses, ou interprétation des données; dans la rédaction du manuscrit, ou dans la décision de publier les résultats.
Remerciements: Les auteurs remercient Editage Company pour l'édition en anglais.
Les conflits d'intérêts: H. Y., N. K., et comme. n'avait aucun conflit d'intérêt à déclarer associé à ce manuscrit; MARYLAND. et HF. a reçu des honoraires de la Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd. et Otsuka Pharmaceutical Co.,
Ltd., mais non lié au consentement de l'étude en cours; HF. a reçu des honoraires de Santen Pharmaceutical Co., Ltd., Senju Pharmaceutical Co., Ltd., White Medical Co., Ltd., Regeneron Pharmaceuticals Inc., Allergan, et Laboratoires Alcon, Inc., mais non lié au consentement de l'étude en cours. Abréviations
Score de qualité de vie lié à la sécheresse oculaire DEQS
PAC conjonctivite allergique perannuelle
SAC conjonctivite allergique saisonnière
BAK chlorure de benzalkonium
Pression intraoculaire PIO
Temps de rupture du film lacrymal TBUT
PAS acide periodique Schif
Références
1. Watanabe, K. Effet du collyre sur l'épithélium cornéen. Folia Ophtalmol. Japon. 2000, 51, 32–36.
2. À présent, H; Vrai, M; Matsumoto, Y.; Fujishima, H. Efficacité et sécurité d'une solution de lavage oculaire dans la conjonctivite allergique après provocation allergénique conjonctivale. Anne. Allergie Asthme Immunol. 2016, 117, 565–566. [RéfCroisée] [PubMed]
3. Iwashita, M; Vrai, M; Yano, H; Saint, Y.; Nozaki, M; Fujishima, H. Effet de la solution de collyre (Solution de lavage commerciale) sur l'épithélium cornéen: Effets indésirables du chlorure de benzalkonium sur la surface des yeux. J. Clin. Exp. Ophtalmol. 2016, 7, 751. [RéfCroisée]
4. Takamura, E.; Uchio, E.; Ebihara, N; Oh non, S; Ohashi, Y.; Okamoto, S; Kumagai, N; pieu, Y.; Shoji, J; Nakagawa, Y.; et al. Lignes directrices japonaises pour les maladies conjonctivales allergiques 2017. Allergol. Int. 2017, 66, 220–229. [RéfCroisée] [PubMed]
5. Gipson, I.K. Cellules caliciformes de la conjonctive: Un examen des découvertes récentes. Programme. Retin Eye Res. 2016, 54, 49–63. [RéfCroisée] [PubMed]
6. C'est ça, Oui. Mucines sécrétées sur la surface oculaire. enquêter. Ophtalmol. Vis. SCI. 2018, 59, DES151 – DES156. [RéfCroisée] [PubMed]
7. Blalock, TD; Spurr-Michaud, SJ; Tisdale, COMME.; Heimer, S.R.; Gilmore, MME.; Ramesh, V; Gipson, I.K. Fonctions de MUC16 dans les cellules épithéliales cornéennes. enquêter. Ophtalmol. Vis. SCI. 2007, 48, 4509–4518. [RéfCroisée] [PubMed]
8. Vrai, M; Matsumoto, Y.; Okada, N; Igarashi, UN.; Fukagawa, K; Shimazaki, J; Tsubota, K; Fujishima, H. Altérations de l'épithélium de surface oculaire MUC16 et des cellules caliciformes MUC5AC chez les patients atteints de kératoconjonctivite atopique. Allergie 2008, 63, 1324–1334. [RéfCroisée]
9. Baudouin, C; Rolando, M; Benítez Del Castillo, J. M.; Messmer, E.M.; Figueiredo, FC; Irlandais, M; Depuis Setten, G.; Labetoulle, M.. Reconsidérer le rôle central des mucines dans la sécheresse oculaire et les maladies de la surface oculaire. Programme. Rétine. Résolution des yeux. 2019, 71, 68–87. [RéfCroisée]
10. Alshamrani, A.A.; Almousa, COMME.; Almulhim, A.A.; Alafaleq, A.A.; Alosaimi, M. B.; Alqahtani, UN M.; Almulhem, UN M.; Alshamrani, MA; Alhallafi, A. H.; Alqahtani, I.Z.; et al. Prévalence et facteurs de risque des symptômes de sécheresse oculaire dans une population saoudienne. Afrique du Moyen-Orient. J. Ophtalmol. 2017, 24, 67–73. [RéfCroisée]
11. Willcox, M.D.P.; argumenter, P; Georgiev, GÉORGIE.; Holopainen, J. M.; Laurie, G. W.; Millier, TJ; Papas, E.B.; Rolland, J.P.; Schmidt, TA; Stahl, U.; et al. Rapport sur le film lacrymal TFOS DEWS II. choc. Le surf. 2017, 15, 366–403. [RéfCroisée] [PubMed]
12. Tsubota, K; Yokoï, N; Shimazaki, J; Watanabe, H; Vrai, M; Yamada, M; Kinoshita, S; Kim, H. M.; Tchah, H. W.; Hyon, J.Y.; et al. Nouvelles perspectives sur la définition et le diagnostic de la sécheresse oculaire: Un rapport de consensus de l'Asia Dry Eye Society. choc. Le surf. 2017, 15, 65–76. [RéfCroisée] [PubMed]
13. Farrand, KF; Fridman, M; Homme mort, I.O.; Schaumberg, D.A.. Prévalence de la sécheresse oculaire diagnostiquée aux États-Unis chez les adultes âgés 18 Ans et plus. Un m. J. Ophtalmol. 2017, 182, 90–98. [RéfCroisée] [PubMed]
14. Ledbetter, C.E.; Münger, R. J.; Bague, R.D.; Scarlett, JM. Efficacité de deux solutions ophtalmiques de sulfate de chondroïtine dans le traitement des défauts épithéliaux cornéens chroniques spontanés et de la kératite ulcéreuse associée à la kératopathie bulleuse chez le chien. Vétérinaire. Ophtalmol. 2006, 9, 77–87. [RéfCroisée] [PubMed]
15. Shimazaki-Den, S; Vrai, M; Higa, K; Shimazaki, J. Les symptômes, fonction visuelle, et expression de la mucine des yeux avec instabilité du film lacrymal. Cornée 2013, 32, 1211–1218. [RéfCroisée] [PubMed]
16. argumenter, P; Balaram, M; Spurr-Michaud, S; Keutman, H.T.; Dana, M.; Gipson, I.K. Diminution des taux de mucine des cellules caliciformes MUC5AC dans les larmes des patients atteints du syndrome de Sjögren. enquêter. Ophtalmol. Vis. SCI. 2002, 43, 1004–1011.
17. Vrai, M; Asano-Kato, N; Tanaka, M; Igarashi, UN.; Shimmura, S; Shimazaki, J; Okada, N; Takano, Y.; Fukagawa, K; Tsubota, K; et al. Altérations de la surface oculaire et du MUC5AC chez les patients atopiques avec des ulcères de la cornée. Courant. Résolution des yeux. 2005, 30, 897–908. [RéfCroisée]
18. Chen, J.J.; Applebaum, DS; Soleil, G. S.; labourer les champs, SC. Kératoconjonctivite atopique: Une critique. J. Un m. Acad. Dermatol. 2014, 70, 569–575. [RéfCroisée]
19. Al Hanaineh, À.; Hassanein, D.H.; Abdelbaky, S. H.; El Zawahry, OM. Hypertension oculaire induite par les stéroïdes dans le groupe d'âge pédiatrique. EUR. J. Ophtalmol. 2018, 28, 372–377. [RéfCroisée] Int. J. Môle. SCI. 2019, 20, 5078 12 de 12
20. Kolbé, L; Kligman, UN M.; Schreiner, V; Stoudemayer, T. Atrophie induite par les corticostéroïdes et altération de la barrière mesurée par des méthodes non invasives dans la peau humaine. Peau Rés. Technologie. 2001, 7, 73–77. [RéfCroisée]
21. Nagata, Y.; Yoshihisa, Y.; Matsunaga, K; Rehman, M.U.; Kitaïchi, N; Shimizu, T. Rôle du facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF) dans la conjonctivite allergique induite par le pollen et la dermatite pollinique chez la souris. PLoS ONE 2015, 10, e0115593. [RéfCroisée] [PubMed]
22. Yokozeki, H; Takayama, K; Katayama, JE.; Nishioka, K. Le pollen de cèdre du Japon comme facteur d'exacerbation de la dermatite atopique: Résultats du patch-test atopique et de l'examen histologique. Acta derme. Vénéréol. 2006, 86, 148–151. [PubMed]
23. Asaï, T. Caractéristiques cliniques et prévention de la dermatite des paupières causée par le pollen de cèdre chez les patients atteints de dermatite atopique. Peau Rés. Technologie. 2008, 7, 62–66.
24. Yokozeki, H. Sensibilisation percutanée et allergie: Pathologie et traitement des dermatites par sensibilisation percutanée au pollen de cèdre. Clin. Immunol. Allergol. 2013, 59, 591–597.
25. Sakane, Y.; Yamaguchi, M; Yokoï, N; Uchino, M; Vrai, M; Oishi, T; Ohashi, Y.; Ohashi, Oui. Développement et validation du questionnaire Dry Eye-Related Quality-of-Life Score. JAMA Ophtalmol. 2013, 131, 1331–1338. [RéfCroisée] [PubMed]
26. Sakane, Y.; Yamaguchi, M; Shiraishi, UNE. Étude observationnelle rétrospective sur la suspension ophtalmique de rébamipide sur la qualité de vie des patients souffrant de sécheresse oculaire. J. Ophtalmol. 2019, 2019, 8145731. [RéfCroisée]
27. Uchino, Y.; Uchino, M; Yokoï, N; Vrai, M; Kawashima, M; Okada, N; Inaba, T; Tamaki, S; Komuro, UN.; Sonomura, Y.; et al. Altération de la mucine lacrymale 5AC chez les employés de bureau utilisant des terminaux à écran visuel: L'étude d'Osaka. JAMA Ophtalmol. 2014, 132, 985–992. [RéfCroisée]