Abstrak: Penggunaan larutan pencuci mata di Jepang, terutama pada pasien dengan konjungtivitis alergi dan pemakai lensa kontak, telah meningkat. Tujuan kami adalah untuk menyelidiki bagaimana penggunaan larutan pencuci mata bebas pengawet pada mata yang sehat selama satu bulan mempengaruhi keamanan kornea dan musin permukaan mata..
Kami menganalisis 42 mata dari 21 individu (17 laki-laki, empat perempuan; usia rata-rata: 36.1 ± 7.4 tahun) tanpa
alergi mata, mata kering, atau penyakit mata lainnya melalui studi prospektif. Mata diacak ke kelompok cuci (kelompok satu) dan grup tindak lanjut nonwash (kelompok dua). Kami mengevaluasi skor kualitas hidup terkait mata kering (DEQS), waktu putus film air mata (TBU), skor pewarnaan fluorescein,ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16, Imunohistokimia MUC16, dan asam periodik MUC5AC Schiff (BUKAN) pewarnaan. Ada penurunan skor DEQS yang signifikan setelah satu bulan penggunaan obat pencuci mata (p < 0.05). Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam item evaluasi lain yang dianalisis (semua p > 0.05). Lebih-lebih lagi, tidak ada perbedaan signifikan yang diamati antara kelompok satu dan kelompok dua di semua titik akhir (semua p > 0.05). Hasilnya menunjukkan bahwa penggunaan satu bulan larutan pencuci mata yang tidak diawetkan tidak memiliki efek merugikan pada lapisan air mata dan musin permukaan mata..
Kata kunci: cuci mata; musin; MUC5AC; MUC16
1. pengantar
Penggunaan larutan pencuci mata di Jepang, terutama pada pasien dengan konjungtivitis alergi dan kontak
pemakai lensa, telah meningkat. Jenis cangkir cuci mata larutan, Eyebon® (Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd.; Osaka, Jepang) diluncurkan di 1995 memicu pengenalan luas solusi pencuci mata. Di masa lalu, larutan pencuci mata mengandung pengawet (benzalkonium klorida [BAKA]) sampai 2002. Gangguan epitel kornea yang terkait dengan penggunaan larutan pencuci mata telah dilaporkan [1]. Saat ini, solusi pencuci mata bebas pengawet telah menjadi populer. Kami telah melaporkan keamanan okular dari larutan pencuci mata yang tidak diawetkan untuk konjungtivitis alergi [2,3]. Bahkan, masalah yang disebabkan oleh pencuci mata komersial, sebagai contoh, infeksi dan mata kering, belum dilaporkan, namun, banyak dokter khawatir bahwa mencuci mata dapat mengubah struktur musin dalam lapisan air mata dan dapat meningkatkan infeksi dan keratokonjungtivitis epitel..
Menurut pedoman Jepang untuk penyakit konjungtiva alergi [4], penggunaan larutan pencuci mata tidak dianjurkan karena risiko kontaminasi kulit di sekitar mata dan pengenalan antigen dari kulit ke permukaan mata, namun, klaim ini belum terbukti. Efek penggunaan obat cuci mata jangka panjang pada permukaan mata belum dipelajari sejauh ini.
Mucin permukaan okular diyakini memberikan penghalang untuk mencegah patogen dan partikel memasuki epitel permukaan okular dan glikosilasi terkait-O yang berat mempertahankan hidrasi permukaan okular dan stabilitas air mata. [5]. Telah dilaporkan bahwa empat subtipe musin yang disekresikan: (MUC2, MUC5AC, MUC7, dan MUC19) dan empat jenis musin terkait membran (MUC1, MUC4, MUC16, dan MUC20) diekspresikan pada permukaan mata [6]. MUC5AC adalah musin pembentuk gel yang disekresikan dari sel goblet konjungtiva dan sebagian besar diekspresikan pada permukaan mata.. Ekspresi MUC16 di glikokaliks permukaan okular membantu memberikan penghalang pelindung nonadhesive untuk permukaan epitel [7]. Kami melaporkan bahwa level ekspresi MUC5AC menurun secara signifikan pada sel epitel konjungtiva pada pasien dengan keratokonjungtivitis atopik., penyakit konjungtiva alergi yang parah, sedangkan ekspresi MUC16 diregulasi [8], namun, efek pencuci mata pada musin dan stabilitas air mata belum sepenuhnya dipahami dan dijelaskan.
Dalam studi ini, kami menyelidiki efek pada keamanan kornea dan musin permukaan okular (MUC5AC dan MUC16) setelah penggunaan larutan pencuci mata bebas pengawet di mata yang sehat selama satu bulan
2. Hasil
2.1. Perubahan skor kualitas hidup terkait mata kering (DEQS) Skor dengan Penggunaan Eyewash Rata-rata skor DEQS pada awal adalah 16.0 ± 12.9, dan pada satu bulan setelah perawatan pencuci mata itu 4.6 ± 5.7 di grup satu dan 7.9 ± 10.6 di grup dua. Ada penurunan yang signifikan setelah satu bulan penggunaan obat cuci mata (p = 0.001), sedangkan di grup dua, tidak ada perbedaan yang signifikan antara baseline dan satu bulan kemudian. (p > 0.05) (Angka 1)
Angka 1. Perubahan skor kualitas hidup terkait mata kering (DEQS) skor. Perhatikan signifikan
perbaikan antara sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata (p = 0.001).
2.2. Perubahan Skor Pewarnaan Permukaan TBUT dan Okuler
Angka 2 menunjukkan perubahan TBUT satu bulan setelah penggunaan obat cuci mata. Rata-rata TBUT di
baseline menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara kelompok-kelompok (kelompok satu: 8.07 ± 3.08 s, kelompok dua:
7.69 ± 2.14 s; p > 0.05). Demikian pula, tidak ada perbedaan yang signifikan pada satu bulan setelah inisiasi
perawatan pencuci mata (kelompok satu: 7.76 ± 2.15 s, kelompok dua: 7.66 ± 2.30 s; p > 0.05). Dalam perbandingan dalam subkelompok, tidak ada penurunan yang signifikan setelah satu bulan (kedua kelompok satu dan
kelompok dua; p > 0.05)
——————————————————-+
Angka 2. Perubahan waktu pemecahan film air mata (TBU). Perhatikan perubahan TBUT yang tidak signifikan antara sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata (p > 0.05).
Tak satu pun dari objek memiliki pewarnaan kornea dan konjungtiva sebelum dan setelah satu bulan penggunaan obat cuci mata.
2.3. Perubahan Level Ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16
Angka 3
menunjukkan level ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16. Untuk MUC5AC, tidak ada penurunan yang signifikan dalam jumlah salinan/ng RNA (GAPDH) dari dasar (kelompok satu: 0.02 ± 0.03, kelompok dua: 0.03 ± 0.05) hingga satu bulan setelah inisiasi penggunaan obat pencuci mata (kelompok satu: 0.02 ± 0.03 kelompok dua: 0.03 ± 0.03) (p > 0.05). Bahkan, tidak ada perbedaan signifikan dalam ekspresi mRNA MUC5AC antara mata yang dicuci dan yang tidak dicuci setelah satu bulan diamati (p > 0.05). Untuk MUC16, tidak ada penurunan yang signifikan dalam jumlah salinan/ng RNA (GAPDH) dari dasar (kelompok satu: 0.29 ± 0.10, kelompok dua: 0.31 ± 0.18) hingga satu bulan setelah inisiasi penggunaan obat pencuci mata (kelompok satu: 0.33 ± 0.19 kelompok dua: 0.33 ± 0.24) (p > 0.05). Sebagai tambahan, tidak ada perbedaan signifikan dalam ekspresi mRNA MUC16 antara mata yang dicuci dan yang tidak dicuci setelah satu bulan diamati (p > 0.05).
—————————————————–
Angka 3. Perubahan ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16. Perhatikan MUC5AC . yang tidak signifikan
dan tingkat ekspresi RNA MUC16 berubah antara sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata (p > 0.05):
(SEBUAH) MUC5AC dan (B) MUC16.
2.4. Perubahan Pewarnaan Imunohistokimia MUC16
Angka 4 menunjukkan pewarnaan imunohistokimia MUC16 yang representatif sebelum dan sesudah satu
bulan penggunaan obat cuci mata di setiap kelompok. Pewarnaan imunohistokimia dari jejak konjungtiva
dari mata menunjukkan pewarnaan positif serupa untuk MUC16. Rasio area yang diwarnai dengan MUC16
antibodi terhadap keseluruhan area sel epitel konjungtiva tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan pada awal (kelompok satu: 1.5 ± 1.3%, kelompok dua: 2.9 ± 3.3%) dan satu bulan setelah penggunaan obat cuci mata (kelompok satu: 2.0 ± 1.9 %, kelompok dua: 2.3 ± 1.7%) (p > 0.05)(Angka 5)
———————————————————————
.Angka 4. Pewarnaan imunohistokimia MUC16 representatif. Perhatikan pewarnaan MUC16 positif sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata (panah merah): (SEBUAH) dasar di grup satu; (B) setelah 1 bulan di grup satu; (C) baseline di grup dua; dan (D) setelah 1 bulan di grup dua.
Angka 5. Rasio area yang diwarnai dengan antibodi MUC16 terhadap keseluruhan area pengambilan seluler. Perhatikan
perubahan pewarnaan antibodi MUC16 yang tidak signifikan antara sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata
(p > 0.05)
2.5. Perubahan Pewarnaan PAS MUC5AC dan Kepadatan Sel Piala
Angka 6 menunjukkan schiff asam periodik MUC5AC yang representatif (BUKAN) pewarnaan sebelum dan sesudah
satu bulan penggunaan obat cuci mata di setiap kelompok. Pewarnaan PAS dari jejak konjungtiva dari mata menunjukkan
pewarnaan positif untuk banyak MUC5AC + sel piala dan area musin mengambil dengan lembaran
sel epitel konjungtiva yang sehat. Angka 7 menunjukkan perbandingan sel goblet konjungtiva
kepadatan antara grup satu dan grup dua pada baseline (kelompok satu: 14.1 ± 23.6 sel/hpf, kelompok dua:
18.0 ± 18.7 sel/hpf) dan satu bulan setelah cuci mata (kelompok satu: 15.3 ± 15.0 sel/hpf, kelompok dua:
18.5 ± 12.6 sel/hpf). Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam kaitannya dengan kedua dalam-subkelompok dan
variasi antar-subgrup (semua p > 0.05
Angka 6. Pewarnaan MUC5AC PAS representatif. Perhatikan banyak MUC5AC + sel piala sebelumnya
dan kemudian 1 bulan cuci mata (panah hitam): (SEBUAH) dasar di grup satu; (B) setelah 1 bulan di grup satu;
(C) baseline di grup dua; dan (D) setelah 1 bulan di grup dua
Angka 7. Jumlah sel goblet dalam asam periodik Schiff (BUKAN) pewarnaan. Perhatikan perubahan yang tidak signifikan pada
jumlah sel piala antara sebelum dan sesudah 1 bulan penggunaan obat cuci mata (p > 0.05)
3. Diskusi
dalam studi ini, kami menemukan bahwa larutan pencuci mata bebas pengawet tidak memiliki efek buruk pada mata
musin permukaan, MUC5AC, dan MUC16 dan tidak menyebabkan kerusakan epitel. Kami sebelumnya
melaporkan bahwa obat cuci mata efektif untuk menghilangkan alergi dan benda asing [2]. Lebih-lebih lagi,
penelitian ini menunjukkan bahwa obat cuci mata tidak secara signifikan mengubah stabilitas air mata pada permukaan mata.
Iwashita dkk.. melaporkan bahwa mata dengan Eyebon® wash memiliki fluorescein dan lissamine yang jauh lebih rendah
skor pewarnaan hijau dibandingkan dengan larutan garam fisiologis yang mengandung BAK [3]. Milik mereka
Hasil penelitian menunjukkan bahwa BAK dapat memperburuk penyakit mata seperti mata kering dan punctate superfisial
keratitis (SPK). Karena itu, penelitian tentang sekresi musin dan sel-sel yang mensekresi musin dapat memberikan informasi yang sangat berharga dan perspektif baru untuk pengelolaan gangguan permukaan mata termasuk mata kering. Perubahan ekspresi musin terkait membran dan sekresi musin pembentuk gel oleh sel goblet telah dicatat pada penyakit permukaan mata termasuk penyakit mata kering adalah alasan umum dan utama untuk kunjungan ke klinik mata.. Dilaporkan bahwa 7,4-33,4% dari populasi dunia telah didiagnosis dengan mata kering (560 juta ke 2.54 miliar pasien) [10,11] Mata kering ditandai dengan hilangnya volume air mata, pemecahan cepat dari film air mata, dan penguapan air mata. Diusulkan bahwa TBUT adalah salah satu temuan objektif inti dalam diagnosis mata kering, dan itu menyebabkan penurunan kinerja visual dan kualitas optik [11].
Karena meningkatnya insiden penyakit ini di Asia, kriteria diagnostik mata kering diperbarui oleh Asia Dry Eye Society [12].
Kriteria yang diperbarui menyoroti peran penting penilaian TBUT dan mendefinisikan TBUT sebagai fenotipe objektif paling penting pada pasien mata kering. Meskipun kelainan musin merupakan salah satu penyebab penurunan TBUT (film air mata yang tidak stabil) dan umum, jarang dievaluasi secara rutin dalam pengaturan praktik klinis [9]. Dalam studi ini, pasiennya relatif muda dan pasien mata kering dikeluarkan. Menurut Farrand dkk., Prevalensi mata kering meningkat seiring bertambahnya usia dan lebih tinggi pada wanita daripada pria [13]. Karena itu, usia dan perbedaan terkait jenis kelamin dalam kaitannya dengan perubahan permukaan mata dengan cuci mata harus dijelaskan di masa depan. Eyebon® mengandung kondroitin sulfat natrium, yang memiliki efek perlindungan pada kornea, dan dipotassium glycyrrhizinate, yang memiliki efek anti-inflamasi. Natrium kondroitin sulfat juga telah terbukti efektif dalam pengobatan cacat epitel kornea dan keratitis ulseratif pada model hewan. [14].
Shimazaki-Den dkk.. melaporkan bahwa tingkat ekspresi MUC5AC di epitel konjungtiva secara signifikan lebih rendah pada pasien dengan mata kering [15]. Argueso dkk.. melaporkan bahwa ekspresi MUC5AC secara signifikan lebih rendah dalam cairan air mata dan sel epitel konjungtiva pada pasien dengan sindrom Sjögren dibandingkan dengan individu normal. [16].
Efek penggunaan larutan pencuci mata pada mata dengan penyakit seperti itu dan tingkat ekspresi musin yang rendah harus segera diselidiki. Ini mungkin memberikan informasi menarik. Jika lingkungan mikro permukaan mata pada pasien tersebut berbeda dari pada orang sehat, tidak dapat dipungkiri bahwa musin berkurang. Karena itu, dalam studi ini, kami bermaksud untuk mempelajari hanya orang sehat dan kemudian pasien dengan penyakit mata apa pun di masa depan, namun, ada pertimbangan etis di Jepang, dan oleh karena itu ini adalah masalah masa depan. Eyebon® ditambahkan sebagai pengatur pH karena dapat disesuaikan dengan pH yang sama dengan air mata untuk mencegah sensasi terbakar. Kita tidak dapat menyangkal kemungkinan bahwa eksipien seperti polisorbat 80, l-menthol, dan dl-kamper juga mungkin memiliki aktivitas kerusakan epitel seperti BAK, tetapi kami tidak mengevaluasinya dalam penelitian ini. Jadi, studi lebih lanjut untuk memeriksa apakah kelainan epitel kornea dapat disebabkan oleh eksipien diperlukan.
Studi ini tidak menunjukkan perubahan signifikan dalam evaluasi objektif (Pewarnaan TBUT dan permukaan okular) sebelum dan sesudah cuci mata, sedangkan evaluasi subjektif (DEQS) telah meningkat secara signifikan setelah mencuci mata. Karena mata kering didiagnosis dengan kombinasi gejala subjektif dan penurunan TBUT [12] di Jepang, temuan kami menunjukkan bahwa kemungkinan memperburuk kondisi mata kering dengan obat cuci mata mungkin sangat rendah, namun, jika skor DEQS meningkat setelah cuci mata, kemungkinan tidak menutup kemungkinan ada bias yang membuat mata yang tidak dirawat semakin tidak nyaman. Jadi, untuk memberikan lebih banyak petunjuk sehubungan dengan fungsi air mata dan perubahan permukaan mata, kami juga melakukan analisis sitologi kesan. Ekspresi MUC5AC dan MUC16 tidak memiliki perubahan signifikan dari awal hingga satu bulan setelah inisiasi penggunaan obat cuci mata. Dalam rasio area yang diwarnai dengan antibodi MUC16 dengan area sel epitel konjungtiva, Pewarnaan PAS dari jejak konjungtiva, dan MUC5AC plus sel piala, tidak ada perbedaan yang signifikan antara sebelum dan sesudah cuci mata. Sebelumnya, kami melaporkan bahwa ekspresi mRNA MUC5AC dan kepadatan sel goblet menunjukkan penurunan drastis pada pasien atopik dengan penyakit epitel parah [17]. Lebih-lebih lagi, banyak noda PAS positif untuk musin dalam spesimen sitologi kesan untuk mata dengan penyakit epitel yang signifikan dan ulkus kornea ditemukan. Sebaliknya, musin sel non-goblet (misalnya, MUC1, 2, 4, dan 16) ekspresi mRNA semuanya diregulasi secara signifikan di mata dengan penyakit epitel yang signifikan dibandingkan dengan mata kontrol yang sehat [8]. Karena itu, sel epitel permukaan okular mungkin mensekresi musin lain untuk mengkompensasi penurunan MUC5AC dan untuk melindungi permukaan okular. mintalah orang lain di sekitar Anda menghubungi dokter Anda untuk Anda saat Anda berkonsentrasi membilas mata Anda, penting untuk mengevaluasi ada tidaknya kelainan epitel kornea sebelum memulai penggunaan obat cuci mata, dan kami akan menyelidiki musin selain MUC5AC dan MUC16 dan kemanjuran penggunaan obat cuci mata pada pasien dengan dermatitis atopik di masa depan
Dalam pengobatan konjungtivitis alergi musiman (KANTUNG) dan konjungtivitis alergi perenial (PAC), antihistamin topikal, stabilisator sel mast, obat anti inflamasi nonsteroid, dan steroid biasanya digunakan, namun, kami terkadang menemui pasien yang refrakter terhadap obat-obatan ini. Meskipun steroid tambahan mungkin diperlukan untuk meredakan gejala pasien, mereka dapat menyebabkan efek samping seperti katarak, infeksi, peningkatan tekanan intraokular yang diinduksi steroid (TIO), glaukoma, atrofi kulit kelopak mata, dan depigmentasi dengan gangguan penghalang [18–20]. Untuk mengatasi masalah tersebut, obat terapi tambahan atau alternatif telah diperlukan. Baru saja, pencuci mata telah digunakan pada pasien dengan SAC atau PAC. Di masa lalu, kami melaporkan bahwa efek antipruritus berlangsung secara signifikan hingga 20 menit setelah mencuci mata [2]. Kami percaya bahwa perawatan pencuci mata terutama efektif untuk reaksi fase awal yang didorong oleh pelepasan histamin akut karena mengandung antihistamin, klorfeniramin maleat. Bahkan, efek pencuci mata pada gejala alergi akut juga diharapkan karena penghilangan alergen secara mekanis dari permukaan mata dengan mencuci., namun, pasien cenderung menggosok mata mereka setelah ini. Pollinosis kulit kelopak mata (dermatitis serbuk sari atau blefaritis serbuk sari) telah dilaporkan menunjukkan bahwa adhesi serbuk sari ke kulit kelopak mata yang tipis dan lembut dengan mudah menyebabkan alergi kulit [21,22]. Karena gatal-gatal terjadi di kulit kelopak mata daripada di bola mata, penanaman okular mungkin tidak seefektif penggunaan obat cuci mata pada pasien tersebut. Perawatan kelopak mata mungkin diperlukan untuk pasien ini [23,24] dan larutan pencuci mata dapat menjadi salah satu metode untuk mengobati atau mencegah gatal-gatal tanpa reaksi obat yang merugikan. Meskipun ini adalah studi satu bulan, obat cuci mata dapat digunakan untuk jangka waktu yang lebih lama dalam pengobatan PAC. Sebagai tambahan, pemakai lensa kontak dikeluarkan dalam penelitian ini, tetapi kita juga harus mempelajari kemanjuran dan keamanan obat pencuci mata pada pemakai lensa kontak. Karena itu, kita harus mempertimbangkan studi masa depan yang lebih luas tentang topik ini. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa penggunaan satu bulan larutan pencuci mata yang tidak diawetkan tidak memiliki efek buruk pada lapisan air mata dan musin permukaan mata..
4. Bahan dan metode 4.1. Desain Studi dan Informasi Pasien Studi ini menganut prinsip Deklarasi Helsinki. Semua prosedur dilakukan sesuai dengan protokol (#610) disetujui oleh dewan peninjau etika institusi dari Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Tsurumi. Informed consent tertulis diperoleh dari semua pasien. Kami melakukan prospektif, studi terkontrol kontralateral di klinik rawat jalan di Departemen Oftalmologi, Rumah Sakit Universitas Tsurumi. Total dari 42 mata masuk 21 individu (17 laki-laki, 4 perempuan; usia rata-rata: 36.1 ± 7.4 tahun) tanpa alergi mata, mata kering, atau penyakit mata lainnya dianalisis. Mata diacak ke kelompok cuci (kelompok satu, n = 21) dan kelompok tindak lanjut tanpa pencucian (kelompok dua, n = 21). Item evaluasi berikut pada baseline dan setelah 1 bulan dibandingkan untuk menganalisis variasi dalam-subkelompok dan variasi antar-subkelompok; DEQS, film air mata TAPI, skor pewarnaan fluorescein, ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16 di konjungtiva, Imunohistokimia MUC16 untuk rasio area yang diwarnai dengan area keseluruhan pengambilan seluler, dan pewarnaan MUC5AC PAS untuk penghitungan kepadatan sel goblet (Meja 1).
Pasien yang memiliki setidaknya salah satu dari berikut: 11 masalah dikecualikan. Pasien dengan:
(1) riwayat hipersensitivitas alergi atau hipersensitivitas yang diketahui terhadap senyawa atau eksipien Eyebon® apa pun,
(2) kondisi mata apa pun yang dapat memengaruhi keselamatan atau parameter studi mereka (glaukoma sudut sempit yang membutuhkan pengobatan atau perawatan laser, blefaritis yang signifikan secara klinis, konjungtivitis folikular, iritasi, pterygium, atau diagnosis mata kering),
(3) riwayat keratokonjungtivitis vernal atau keratokonjungtivitis atopik,
(4) intervensi bedah mata di masa lalu 3 bulan sebelumnya atau operasi refraktif di masa lalu 6 bulan sebelum belajar,
(5) adanya infeksi mata aktif (bakteri, virus, atau jamur) atau limfadenopati preauricular, atau infeksi herpes okular,
(6) penyakit sistemik yang tidak terkontrol,
(7) riwayat status asmatikus, asma sedang atau berat persisten, atau reaksi asma alergi sedang hingga berat untuk mempelajari alergen,
(8) manifestasi tanda atau gejala konjungtivitis alergi yang aktif secara klinis (didefinisikan sebagai adanya gatal atau >1 hiperemia di dasar pembuluh konjungtiva) di kedua mata pada kunjungan pertama mereka. Pasien yang
(9) sedang hamil, perawatan, atau merencanakan kehamilan,
(10) memakai lensa kontak,
(11) pernah menggunakan obat apapun (topikal, mata topikal, sistemik atau injeksi) selama periode yang ditunjukkan sebelum dan selama masa studi. Ini termasuk aspirin, mengandung aspirin produk, Antihistamin antagonis H1 (termasuk mata), dan semua terapi anti-alergi lainnya, yang termasuk resep, perhitungan berlebihan, agen homeopati, semua persiapan mata topikal lainnya (termasuk pengganti air mata) selain tetes belajar, kortikosteroid atau stabilisator sel mast, dan depot kortikosteroid.
9+—————————————————
4.2. Ya ya®
Eyebon® adalah solusi pencuci mata komersial yang digunakan dalam percobaan hewan dan pemeriksaan klinis manusia, yang dapat digunakan, hingga enam kali/hari, berdasarkan standar persetujuan manufaktur dan pemasaran untuk over-the-counter (OTC) narkoba. Pencucian harus dilakukan selama 30 detik per pemberian berdasarkan laporan gangguan epitel kornea [1]. Pertama, kosmetik dan noda di sekitar mata dibersihkan sebelum digunakan. Kedua, larutan dituangkan, hingga 5 ml, ke dalam cangkir pencuci mata yang terpasang, dan ditekan dengan kuat ke mata. Akhirnya, sambil menekan cangkir ke mata, pasien menghadap ke atas dengan meletakkan kepala ke belakang berhati-hati agar tidak menumpahkan solusinya, dan mata dicuci dengan beberapa kedipan. Ada banyak jenis Eyebon®; kami menggunakan “Vitamin Eyebon® W”. Solusinya tidak mengandung BAK, tapi berikut bahan aktifnya (di 100 ml): Dipotassium glycyrrhizinate 25 mg, klorfeniramin maleat 3 mg, taurin 100 mg, piridoksin hidroklorida (vitamin B6) 10 mg, sianokobalamin (vitamin B12) 1 mg, dan kondroitin sulfat natrium 10 mg. Eksipien berikut juga disertakan: (di 100 ml): asam borat, boraks, polisorbat 80, natrium edetat, propilen glikol, l-menthol, dl-kamper, dan pengatur pH.
4.3. Daftar pertanyaan
Skor DEQS adalah kuesioner khusus mata kering Jepang yang telah divalidasi yang telah digunakan untuk menilai gejala dan pengaruhnya terhadap kualitas hidup (QOL) pada individu Jepang [25]. DEQS terdiri dari: 15 item yang terkait dengan gejala mata kering dan pengaruhnya pada kehidupan sehari-hari, dan tingkat keseluruhan penurunan kualitas hidup dihitung sebagai skor ringkasan dari 0–100 poin.
4.4. Tes Fungsi Air Mata dan Pewarnaan Permukaan Mata
Kami menilai TBUT dan skor pewarnaan fluorescein kornea dan konjungtiva sebelum dan sesudah penelitian, seperti yang diberitakan sebelumnya [26,27]. Skor TBUT diukur dengan pengamatan kornea dan konjungtiva melalui slit lamp setelah berangsur-angsur a 2 L larutan fluorescein ke dalam kantung konjungtiva. Waktu dari kedipan normal hingga munculnya titik kering pertama di film air mata diukur. Pewarnaan permukaan okular fluorescein dilakukan dengan filter penghalang bebas biru. Permukaan okular dibagi menjadi tiga zona berikut:: konjungtiva bulbi hidung, kornea,
dan konjungtiva bulbi temporalis. Skor pewarnaan maksimum untuk setiap area adalah 3 poin, dan skor pewarnaan maksimum untuk keseluruhan permukaan adalah 9 poin.
4.5. Sitologi Kesan Konjungtiva
Spesimen sitologi kesan diperoleh setelah pemberian anestesi topikal dengan 0.4% oksibuprokain. Tiga strip terpisah dari kertas saring selulosa asetat (Milipore HAWP 304, Bedford, MA, Amerika Serikat) yang telah direndam dalam air suling selama beberapa jam dan dikeringkan pada suhu kamar (25 C) diterapkan pada temporal superior, temporal rendah, dan konjungtiva bulbi nasalis inferior. Area-area ini ditekan dengan lembut oleh batang kaca dan kemudian dihapus (Angka 8). Spesimen kemudian difiksasi dengan formaldehida. Int. J. mol. ilmu pengetahuan. 2019, 20, x UNTUK TINJAUAN BERSAMA 9 dari 12 4.5. Kesan Konjungtiva
Sitologi
Spesimen sitologi kesan diperoleh setelah pemberian anestesi topikal dengan 0.4% oksibuprokain. Tiga strip terpisah dari kertas saring selulosa asetat (Milipore HAWP 304, Bedford, MA, Amerika Serikat) yang telah direndam dalam air suling selama beberapa jam dan dikeringkan pada suhu kamar (25 ° C) diterapkan pada temporal superior, temporal rendah, dan konjungtiva bulbi nasalis inferior. Area-area ini ditekan dengan lembut oleh batang kaca dan kemudian dihapus (Angka 8). Spesimen kemudian difiksasi dengan formaldehida.
Spesimen dari konjungtiva bulbar temporal superior adalah untuk PCR MUC5AC dan MUC16. Spesimen dari konjungtiva bulbar temporal inferior dialokasikan untuk pewarnaan imunohistokimia untuk mengkonfirmasi keberadaan MUC16. Spesimen dari konjungtiva bulbar hidung inferior diwarnai dengan PAS untuk MUC5A
———————————————————————————-
Angka 8. Area sitologi kesan:
(SEBUAH) konjungtiva bulbar superior untuk RT-PCR MUC5AC dan MUC16,
(B) konjungtiva bulbar temporal inferior untuk imunohistokimia MUC16, dan
(C) konjungtiva bulbar hidung inferior untuk pewarnaan MUC5AC PAS. 4.6. PCR Real-Time Kuantitatif untuk RNA Ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16 diekstraksi dari sampel isogen. qRT-PCR dilakukan sesuai dengan instruksi pabriknya (Biosistem Terapan, Weiterstadt, Jerman). cDNA (10 dari) diperkuat dalam 30 L volume akhir dengan adanya 1.2 L oligonukleotida ”Pengujian dengan Desain” (MUC5AC dan MUC16 dan GAPDH; Biosistem Terapan). Primer gen uji dan set probe dioptimalkan untuk konsentrasi, efisiensi amplifikasi, dan co-amplifikasi yang setia dengan primer gen pembantu rumah tangga dan set probe, yang terakhir termasuk GAPDH. Sebuah qRT-PCR didirikan di 96- pelat sumur menggunakan reagen di atas dan campuran master TaqMan dan seperti yang ditunjukkan oleh data optimasi dan dijalankan pada 7000 Pengendara sepeda termal ABI (Biosistem Terapan). Profil termal terdiri dari: 50 °C untuk 2 saya, 95 °C untuk 2 saya, diikuti oleh 40 siklus dari 95 °C untuk 15 detik dan 60 ° C 30 s. Data waktu nyata diperoleh dan dianalisis menggunakan Perangkat Lunak Sistem Deteksi Urutan (Biosistem Terapan) dengan penyesuaian manual dari parameter dasar dan ambang batas. Tingkat ekspresi mRNA dinormalisasi oleh ekspresi median dari gen rumah tangga (GAPDH). Urutan primer PCR waktu nyata ditunjukkan pada Tabel 2.
4.7. Pewarnaan imunohistokimia untuk MUC16
Spesimen sitologi kesan untuk pewarnaan imunohistokimia MUC16 ditempatkan dalam kaset embedding berfenestrasi plastik (murazumi, Osaka, Jepang). Kemudian dicelupkan ke dalam toples kaca yang berisi 10 mM buffer natrium sitrat (pH 6.0) dan menjadi sasaran perlakuan gelombang mikro pada 500 untuk 5 menit untuk mengaktifkan antigen. Spesimen kemudian dicuci dengan saline buffer fosfat (PBS) dua kali untuk 5 saya. Spesimen ditempatkan pada slide dan diblokir di 5 mL PBS dengan
2 tetes albumin serum kuda untuk 20 saya. Antibodi MUC16 monoklonal tikus utama pada pengenceran 1:50 (PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, Jerman) diterapkan untuk 24 h di kamar Gambar 8. Area sitologi kesan: (SEBUAH) konjungtiva bulbar superior untuk RT-PCR MUC5AC dan MUC16, (B) konjungtiva bulbar temporal inferior untuk imunohistokimia MUC16, dan (C) konjungtiva bulbar hidung inferior untuk pewarnaan MUC5AC PAS. Spesimen dari konjungtiva bulbar temporal superior adalah untuk PCR MUC5AC dan MUC16. Spesimen dari konjungtiva bulbar temporal inferior dialokasikan untuk pewarnaan imunohistokimia untuk mengkonfirmasi keberadaan MUC16. Spesimen dari konjungtiva bulbar hidung inferior diwarnai dengan PAS untuk MUC5AC, dehidrasi dalam kadar etanol yang meningkat dan kemudian dengan xylol, dan akhirnya penutup terpeleset. 4.6. PCR Real-Time Kuantitatif untuk Ekspresi mRNA MUC5AC dan MUC16
RNA diekstraksi dari sampel isogen. qRT-PCR dilakukan sesuai dengan instruksi pabriknya (Biosistem Terapan, Weiterstadt, Jerman). cDNA (10 dari) diperkuat dalam 30 L volume akhir dengan adanya 1.2 L oligonukleotida ”Pengujian dengan Desain” (MUC5AC dan MUC16 dan GAPDH; Biosistem Terapan). Primer gen uji dan set probe dioptimalkan untuk konsentrasi, efisiensi amplifikasi, dan co-amplifikasi yang setia dengan primer gen pembantu rumah tangga dan set probe, yang terakhir termasuk GAPDH. Sebuah qRT-PCR dipasang di pelat 96-sumur menggunakan reagen di atas dan campuran master TaqMan dan seperti yang ditunjukkan oleh data optimasi dan dijalankan pada 7000 Pengendara sepeda termal ABI (Biosistem Terapan). Profil termal terdiri dari: 50 C untuk 2 saya, 95 C untuk 2 saya, diikuti oleh 40 siklus dari 95 C untuk 15 detik dan 60 C 30 s. Data waktu nyata diperoleh dan dianalisis menggunakan Perangkat Lunak Sistem Deteksi Urutan (Biosistem Terapan) dengan penyesuaian manual dari parameter dasar dan ambang batas. Tingkat ekspresi mRNA dinormalisasi oleh ekspresi median dari gen rumah tangga (GAPDH). Urutan primer PCR waktu nyata ditunjukkan pada Tabel2 ————————————————————– 4.7. Pewarnaan imunohistokimia untuk MUC16
Spesimen sitologi kesan untuk pewarnaan imunohistokimia MUC16 ditempatkan dalam kaset embedding berfenestrasi plastik (murazumi, Osaka, Jepang). Kemudian dicelupkan ke dalam toples kaca yang berisi 10 mM buffer natrium sitrat (pH 6.0) dan menjadi sasaran perlakuan gelombang mikro pada 500 untuk 5 menit untuk mengaktifkan antigen. Spesimen kemudian dicuci dalam saline buffer fosfat (PBS) dua kali untuk 5 saya. Spesimen ditempatkan pada slide dan diblokir di 5 mL PBS dengan 2 tetes albumin serum kuda untuk 20 saya. Antibodi MUC16 monoklonal tikus utama pada pengenceran 1:50 (PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, Jerman) diterapkan untuk 24 jam pada suhu kamar (25 C) dalam ruang lembab dan kemudian slide dibilas dengan PBS 3 kali untuk 5 saya. Sampel diproses menggunakan VECTASTAIN ABC Kit (DAKO, Bersama, Karpinteria, CA, Amerika Serikat) protokol (3,30 pewarnaan diaminobenzidin-peroksida). Secara singkat, spesimen dikembangkan dengan 0.025% 3,30 diaminobenzidin (Sigma Kimia, Bersama, ST. Louis, MO, Amerika Serikat) dicampur dengan 0.3% H2O2, dan diwarnai dengan hematoxylin. Dehidrasi dengan perendaman dalam larutan etil alkohol yang lebih pekat berturut-turut, diikuti dengan perendaman dalam xilena semalaman. Akhirnya, spesimen dipindahkan ke botol kaca dan ditutup dengan media pemasangan untuk pemeriksaan mikroskopis ringan. Evaluasi spesimen di bawah mikroskop cahaya untuk adanya pewarnaan imunohistokimia positif juga dilakukan secara tertutup.
4.8. MUC5AC Asam Berkala Schiff (BUKAN) Pewarnaan untuk Hitungan Kepadatan Sel Piala
Studi kuantitatif sel goblet konjungtiva dilakukan dengan mengambil foto menggunakan grid terkalibrasi di bawah mikroskop cahaya pada perbesaran 400x.. Kami memotret tiga area yang tidak tumpang tindih dari setiap sampel yang dipilih secara acak dan rata-rata hasilnya untuk skor sampel tunggal. Jumlah kepadatan sel piala dilaporkan sebagai sel per medan daya tinggi (GC/HPF). Peneliti yang sama yang cocok dengan siapa sampel berasal mengevaluasi spesimen untuk jumlah sel piala dan pengambilan musin. 4.9. Analisis statistik
Data dianalisis menggunakan software Prism (ver. 8.1.0 untuk Mac; GraphPad Software Inc, San Diego, CA, Amerika Serikat) dan Excel untuk Mac (ver. 16.16.11; perusahaan Microsoft, Redmond, WA, Amerika Serikat). Untuk membandingkan perbedaan parameter okular klinis antara kelompok, uji-t berpasangan digunakan. Semua data dinyatakan sebagai mean ± standar deviasi (SD). Nilai-p < 0.05 dianggap menunjukkan signifikansi statistik.
Kontribusi Penulis: M.D. dan H.F. menyusun dan merancang eksperimen; M.D., SEBAGAI., dan H.F. melakukan percobaan; H.Y., N.K., M.D., dan H.F. menganalisis hasilnya; H.Y. dan M.D. menulis manuskrip; semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.
Pendanaan: Studi ini disponsori dan didanai oleh Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd.—Pemberi dana tidak memiliki peran dalam desain penelitian; dalam koleksi, analisis, atau interpretasi data; dalam penulisan naskah, atau dalam keputusan untuk mempublikasikan hasil.
Ucapan Terima Kasih: Penulis berterima kasih kepada Editage Company untuk pengeditan bahasa Inggris.
Konflik kepentingan: H.Y., N.K., dan sebagai. tidak memiliki konflik kepentingan untuk menyatakan terkait dengan naskah ini; M.D. dan H.F. menerima honorarium dari Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd. dan Otsuka Pharmaceutical Co.,
Ltd., tetapi tidak terkait dengan persetujuan penelitian saat ini; HF. menerima honorarium dari Santen Pharmaceutical Co., Ltd., Senju Pharmaceutical Co., Ltd., putih medis co., Ltd., Regeneron Pharmaceuticals Inc., alergi, dan Alcon Laboratories, Inc., tetapi tidak terkait dengan persetujuan penelitian saat ini. Singkatan
Skor kualitas hidup terkait mata kering DEQS
Konjungtivitis alergi abadi PAC
Konjungtivitis alergi musiman SAC
BAK benzalkonium klorida
Tekanan intraokular TIO
Waktu putusnya film air mata TBUT
PAS asam periodik Schiff
Referensi
1. Watanabe, K. Efek pencuci mata pada epitel kornea. Oftalmol Folia. Jpn. 2000, 51, 32–36.
2. Sekarang, H.; BENAR, M.; Matsumoto, Y.; Fujishima, H. Khasiat dan keamanan larutan pencuci mata pada konjungtivitis alergi setelah tantangan alergen konjungtiva. Ann. Alergi Asma Imun. 2016, 117, 565–566. [CrossRef] [PubMed]
3. Iwashita, M.; BENAR, M.; Ya Tidak, H.; Santo, Y.; Nozaki, M.; Fujishima, H. Efek Solusi Pencuci Mata (Solusi Pencucian Komersial) pada Epitel Kornea: Efek Merugikan Benzalkonium Klorida pada Permukaan Mata. J. klinik. exp. Oftalmol. 2016, 7, 751. [CrossRef]
4. Takamura, E.; uchio, E.; Ebihara, N.; Oh tidak, S.; Ohashi, Y.; okamoto, S.; Kumagai, N.; mempertaruhkan, Y.; Shoji, J.; Nakagawa, Y.; dkk. Pedoman Jepang untuk penyakit konjungtiva alergi 2017. alergi. Int. 2017, 66, 220–229. [CrossRef] [PubMed]
5. Gipson, I.K. Sel goblet pada konjungtiva: Tinjauan atas temuan terbaru. Prog. Retin Eye Res. 2016, 54, 49–63. [CrossRef] [PubMed]
6. Itu, kamu. Lendir yang Disekresikan di Permukaan Mata. menyelidiki. Oftalmol. melihat. ilmu pengetahuan. 2018, 59, DES151–DES156. [CrossRef] [PubMed]
7. hitam, T.D.; Spurr-Michaud, SJ; Tisdale, SEBAGAI.; Heimer, S.R.; Gilmore, NONA.; Ramesh, V; Gipson, I.K. Fungsi MUC16 dalam sel epitel kornea. menyelidiki. Oftalmol. melihat. ilmu pengetahuan. 2007, 48, 4509–4518. [CrossRef] [PubMed]
8. BENAR, M.; Matsumoto, Y.; Okada, N.; Igarashi, SEBUAH.; Fukagawa, K; Shimazaki, J.; Tsubota, K; Fujishima, H. Perubahan MUC16 epitel permukaan okular dan sel goblet MUC5AC pada pasien dengan keratokonjungtivitis atopik. Alergi 2008, 63, 1324–1334. [CrossRef]
9. Baudouin, C.; Rolando, M.; Benitez Del Castillo, JM; Messmer, E.M.; Figueiredo, F.C.; orang Irlandia, M.; dari Setten, G.; labetoulle, M. Mempertimbangkan kembali peran sentral musin pada mata kering dan penyakit permukaan mata. Prog. Retin. Resolusi Mata. 2019, 71, 68–87. [CrossRef]
10. Alshamrani, A A.; Almousa, SEBAGAI.; Almuhim, A A.; Alafaleq, A A.; alosaimi, M.B.; Alqahtani, SAYA.; Almuhem, SAYA.; Alshamrani, MA; Baiklah, AH.; Alqahtani, I.Z.; dkk. Prevalensi dan Faktor Risiko Gejala Mata Kering pada Populasi Arab Saudi. Afrika Timur Tengah. J. Oftalmol. 2017, 24, 67–73. [CrossRef]
11. Willcox, MDP; Argueso, P.; Georgiev, G.A.; Holopainen, JM; Laurie, GW; Millar, TJ; Papa, E.B.; Rolland, J.P.; Schmidt, T.A.; Stahl, U.; dkk. Laporan Film Air Mata TFOS DEWS II. terkejut. Berselancar. 2017, 15, 366–403. [CrossRef] [PubMed]
12. Tsubota, K; Yokoi, N.; Shimazaki, J.; Watanabe, H.; BENAR, M.; Yamada, M.; Kinoshita, S.; Kim, H.M.; tcha, HW; Hyon, JY; dkk. Perspektif Baru tentang Definisi dan Diagnosis Mata Kering: Laporan Konsensus oleh Asia Dry Eye Society. terkejut. Berselancar. 2017, 15, 65–76. [CrossRef] [PubMed]
13. Farrand, K.F.; Friedman, M.; Stillman, I.O.; Schaumberg, D.A. Prevalensi Penyakit Mata Kering yang Didiagnosis di Amerika Serikat Di Antara Orang Dewasa Berusia 18 Tahun dan Lebih Tua. Saya. J. Oftalmol. 2017, 182, 90–98. [CrossRef] [PubMed]
14. dipimpin lebih baik, E.C.; Munger, RJ; Cincin, R.D.; Scarlett, J.M. Khasiat dua larutan mata kondroitin sulfat dalam terapi defek epitel kornea kronis spontan dan keratitis ulseratif yang terkait dengan keratopati bulosa pada anjing. Dokter hewan. Oftalmol. 2006, 9, 77–87. [CrossRef] [PubMed]
15. Shimazaki Den, S.; BENAR, M.; Berbaring, K; Shimazaki, J. Gejala, fungsi visual, dan ekspresi musin mata dengan ketidakstabilan lapisan air mata. Kornea 2013, 32, 1211–1218. [CrossRef] [PubMed]
16. Argueso, P.; Balaram, M.; Spurr-Michaud, S.; Keutman, H.T.; Dan, PAK.; Gipson, I.K. Penurunan kadar musin sel piala MUC5AC pada air mata pasien dengan sindrom Sjogren. menyelidiki. Oftalmol. melihat. ilmu pengetahuan. 2002, 43, 1004–1011.
17. BENAR, M.; Asano-Kato, N.; Tanaka, M.; Igarashi, SEBUAH.; Shimura, S.; Shimazaki, J.; Okada, N.; Takano, Y.; Fukagawa, K; Tsubota, K; dkk. Permukaan okular dan perubahan MUC5AC pada pasien atopik dengan ulkus pelindung kornea. Curr. Resolusi Mata. 2005, 30, 897–908. [CrossRef]
18. Chen, BUKAN SEBUAH KATA.; Applebaum, D.S.; Matahari, G.S.; membajak sawah, S.C. Keratokonjungtivitis atopik: Sebuah ulasan. J. Saya. Acad. Dermatologi. 2014, 70, 569–575. [CrossRef]
19. Al Hanaineh, PADA.; Hassanein, D.H.; Abdelbaky, SH.; El Zawahry, O.M. Hipertensi okular yang diinduksi steroid pada kelompok usia pediatrik. euro. J. Oftalmol. 2018, 28, 372–377. [CrossRef] Int. J. mol. ilmu pengetahuan. 2019, 20, 5078 12 dari 12
20. Kolbe, L; Kligman, SAYA.; Schreiner, V; stoudemayer, T. Atrofi dan gangguan penghalang yang diinduksi kortikosteroid diukur dengan metode non-invasif pada kulit manusia. Resolusi Kulit. teknologi. 2001, 7, 73–77. [CrossRef]
21. Nagata, Y.; Yoshihisa, Y.; Matsunaga, K; Rehman, M.U.; Kitaichi, N.; Shimizu, T. Peran faktor penghambat migrasi makrofag (MIF) pada konjungtivitis alergi yang diinduksi serbuk sari dan dermatitis serbuk sari pada tikus. PLoS SATU 2015, 10, e0115593. [CrossRef] [PubMed]
22. Yokozeki, H.; Takayama, K; Katayama, SAYA.; Nishioka, K. Serbuk sari cedar Jepang sebagai faktor eksaserbasi pada dermatitis atopik: Hasil uji tempel atopi dan pemeriksaan histologis. Acta Derm. Venereol. 2006, 86, 148-151. [PubMed]
23. Asai, T. Gambaran Klinis dan Pencegahan Dermatitis Kelopak Mata yang Disebabkan oleh Serbuk Sari Cedar pada Penderita Dermatitis Atopik. Resolusi Kulit. teknologi. 2008, 7, 62–66.
24. Yokozeki, H. Sensitisasi dan alergi perkutan: Patologi dan pengobatan dermatitis dengan sensitisasi perkutan dengan serbuk sari cedar. klinik. kekebalan. alergi. 2013, 59, 591–597.
25. Dari sana, Y.; Yamaguchi, M.; Yokoi, N.; Uchino, M.; BENAR, M.; Oishi, T.; Ohashi, Y.; Ohashi, kamu. Pengembangan dan validasi kuesioner Skor Kualitas Hidup Terkait Mata Kering. Oftalmol JAMA. 2013, 131, 1331–1338. [CrossRef] [PubMed]
26. Dari sana, Y.; Yamaguchi, M.; Shiraishi, SEBUAH. Studi Observasi Retrospektif Suspensi Rebamipide Oftalmik Terhadap Kualitas Hidup Pasien Penyakit Mata Kering. J. Oftalmol. 2019, 2019, 8145731. [CrossRef]
27. Uchino, Y.; Uchino, M.; Yokoi, N.; BENAR, M.; Kawashima, M.; Okada, N.; Inaba, T.; Tamaki, S.; Komuro, SEBUAH.; sonomura, Y.; dkk. Perubahan musin air mata 5AC pada pekerja kantor menggunakan terminal tampilan visual: Studi Osaka. Oftalmol JAMA. 2014, 132, 985–992. [CrossRef]