Абстрактный: Использование растворов для промывания глаз в Японии, особенно у пациентов с аллергическим конъюнктивитом и тех, кто носит контактные линзы, увеличивается. Нашей целью было изучить, как использование раствора для промывания глаз без консервантов на здоровых глазах в течение одного месяца влияет на безопасность роговицы и муцин поверхности глаза..
Мы проанализировали 42 глаза 21 люди (17 мужчины, четыре женщины; средний возраст: 36.1 ± 7.4 лет) без
глазная аллергия, сухие глаза, или другие глазные заболевания в ходе проспективного исследования. Глаза были рандомизированы в группу промывания. (первая группа) и контрольная группа, не требующая мытья (вторая группа). Мы оценили показатель качества жизни, связанный с синдромом сухого глаза. (ДЭКС), время разрыва слезной пленки (ТУТ), оценка окрашивания флуоресцеином,Экспрессия мРНК MUC5AC и MUC16, Иммуногистохимия MUC16, и периодическая кислота MUC5AC Шиффа (НЕТ) окрашивание. После одного месяца использования промывания глаз наблюдалось значительное снижение показателей DEQS. (п < 0.05). По другим анализируемым пунктам оценки существенных различий не выявлено. (Все Р > 0.05). более того, не наблюдалось существенных различий между первой и второй группой по всем конечным точкам. (Все Р > 0.05). Результаты показывают, что использование раствора для промывания глаз без консервантов в течение одного месяца не оказывает вредного воздействия на слезную пленку и слизистые оболочки глазной поверхности..
Ключевые слова: очковтирательство; муцин; MUC5AC; MUC16
1. Введение
Использование растворов для промывания глаз в Японии, особенно у пациентов с аллергическим конъюнктивитом и контактным
владельцы линз, увеличивается. Тип чашки для промывания глаз решение, Айбон® (Кобаяши Фармасьютикал Ко., ООО; Осака, Япония) был запущен в 1995 вызывая широкое признание растворов для промывания глаз. В прошлом, растворы для промывания глаз содержали консерванты (хлорид бензалкония [БАК]) до 2002. Сообщалось о нарушениях эпителия роговицы, связанных с использованием растворов для промывания глаз. [1]. В настоящее время, растворы для промывания глаз без консервантов стали популярными. Мы уже сообщали о безопасности для глаз растворов для промывания глаз без консервантов при аллергическом конъюнктивите. [2,3]. более того, проблемы, вызванные коммерческим промыванием глаз, например, инфекция и сухость глаз, еще не сообщалось, Однако, Многие врачи обеспокоены тем, что промывание глаз может изменить структуру муцина слезной пленки и способствовать развитию инфекции и эпителиального кератоконъюнктивита..
Согласно японским рекомендациям по аллергическим заболеваниям конъюнктивы. [4], использование растворов для промывания глаз не рекомендуется из-за риска загрязнения кожи вокруг глаз и попадания антигенов с кожи на поверхность глаза., Однако, эти утверждения не были доказаны. Влияние длительного промывания глаз на поверхность глаза до сих пор не изучено..
Считается, что муцины поверхности глаза обеспечивают барьер, предотвращающий проникновение патогенов и твердых частиц в эпителий поверхности глаза, а их тяжелое О-связанное гликозилирование поддерживает гидратацию поверхности глаза и устойчивость к слезам. [5]. Сообщалось, что четыре подтипа секретируемых муцинов (MUC2, MUC5AC, MUC7, и MUC19) и четыре типа мембраносвязанных муцинов (MUC1, MUC4, MUC16, и MUC20) выражены на поверхности глаза [6]. MUC5AC представляет собой гелеобразующий муцин, секретируемый бокаловидными клетками конъюнктивы и экспрессирующийся преимущественно на поверхности глаза.. Экспрессия MUC16 в гликокаликсе поверхности глаза помогает создать неадгезивный защитный барьер для эпителиальной поверхности. [7]. Мы сообщили, что уровни экспрессии MUC5AC значительно снизились в эпителиальных клетках конъюнктивы у пациентов с атопическим кератоконъюнктивитом., тяжелое аллергическое заболевание конъюнктивы, тогда как экспрессия MUC16 была повышена [8], Однако, влияние промывания глаз на стабильность муцина и слез до конца не изучено и не выяснено..
в этом исследовании, мы исследовали влияние на безопасность роговицы и муцин глазной поверхности. (MUC5AC и MUC16) после использования раствора для промывания глаз без консервантов на здоровых глазах в течение одного месяца
2. Полученные результаты
2.1. Изменения показателя качества жизни, связанного с синдромом сухого глаза (ДЭКС) Результаты при использовании промывания глаз. Средний балл DEQS на исходном уровне составил 16.0 ± 12.9, и через месяц после промывания глаз это было 4.6 ± 5.7 в первой группе и 7.9 ± 10.6 во второй группе. После месяца использования промывания глаз наблюдалось значительное снижение. (р = 0.001), тогда как во второй группе, there was no significant difference between baseline and one month later. (п > 0.05) (Фигура 1)
Фигура 1. Изменения показателя качества жизни, связанного с синдромом сухого глаза (ДЭКС) score. Note the significant
improvement between before and after 1 month of eyewash use (р = 0.001).
2.2. Changes in the TBUT and Ocular Surface Staining Scores
Фигура 2 shows the changes in the TBUT one month after eyewash use. The mean TBUT at
baseline showed no significant difference among the groups (первая группа: 8.07 ± 3.08 s, вторая группа:
7.69 ± 2.14 s; п > 0.05). Сходным образом, there was no significant difference at one month after initiation of
eyewash treatment (первая группа: 7.76 ± 2.15 s, вторая группа: 7.66 ± 2.30 s; п > 0.05). In the comparisons within the subgroups, there were no significant deteriorations after one month (both group one and
вторая группа; п > 0.05)
——————————————————-+
Фигура 2. Changes in tear film breakup time (ТУТ). Note the nonsignificant TBUT changes between before and after 1 month of eyewash use (п > 0.05).
None of the objects had any corneal and conjunctival staining before and after one month of eyewash use.
2.3. Changes in the MUC5AC and MUC16 mRNA Expression Levels
Фигура 3
показаны уровни экспрессии мРНК MUC5AC и MUC16.. Для MUC5AC, значимого снижения числа копий/нг РНК не наблюдалось (ГАФДГ) от базового уровня (первая группа: 0.02 ± 0.03, вторая группа: 0.03 ± 0.05) через месяц после начала использования промывания глаз (первая группа: 0.02 ± 0.03 вторая группа: 0.03 ± 0.03) (п > 0.05). более того, через месяц не наблюдалось значительной разницы в экспрессии мРНК MUC5AC между промытыми и непромытыми глазами. (п > 0.05). Для MUC16, значимого снижения количества копий/нг РНК не наблюдалось (ГАФДГ) от базового уровня (первая группа: 0.29 ± 0.10, вторая группа: 0.31 ± 0.18) через месяц после начала использования промывания глаз (первая группа: 0.33 ± 0.19 вторая группа: 0.33 ± 0.24) (п > 0.05). К тому же, через месяц не наблюдалось значительной разницы в экспрессии мРНК MUC16 между промытыми и непромытыми глазами. (п > 0.05).
—————————————————–
Фигура 3. Изменения экспрессии мРНК MUC5AC и MUC16. Обратите внимание на несущественный MUC5AC.
и уровень экспрессии РНК MUC16 изменяется между до и после 1 month of eyewash use (п > 0.05):
(А) MUC5AC и (В) MUC16.
2.4. Изменения в иммуногистохимическом окрашивании MUC16
Фигура 4 показано репрезентативное иммуногистохимическое окрашивание MUC16 до и после одного
месяц использования промывания глаз в каждой группе. Иммуногистохимическое окрашивание отпечатков конъюнктивы.
из глаз показали аналогичное положительное окрашивание на MUC16.. Соотношения площадей, окрашенных MUC16
антитела к общим площадям эпителиальных клеток конъюнктивы не показали существенных различий на исходном уровне (первая группа: 1.5 ± 1.3%, вторая группа: 2.9 ± 3.3%) и через месяц после промывания глаз (первая группа: 2.0 ± 1.9 %, вторая группа: 2.3 ± 1.7%) (п > 0.05)(Фигура 5)
———————————————————————
.Фигура 4. Репрезентативное иммуногистохимическое окрашивание MUC16. Обратите внимание на положительное окрашивание MUC16 до и после. 1 month of eyewash use (красные стрелки): (А) базовый уровень в первой группе; (В) после 1 месяц в первой группе; (С) базовый уровень во второй группе; а также (D) после 1 месяц во второй группе.
Фигура 5. Отношение площадей, окрашенных антителами MUC16, к общей площади захвата клеток. Обратите внимание
незначительные изменения в окрашивании антителом MUC16 между «до» и «после» 1 month of eyewash use
(п > 0.05)
2.5. Изменения окраски MUC5AC PAS и плотности бокаловидных клеток
Фигура 6 показан представитель Шиффа периодической кислоты MUC5AC. (НЕТ) окрашивание до и после
один месяц использования промывания глаз в каждой группе. Окрашивание PAS конъюнктивальных отпечатков глаз показало
положительное окрашивание на многочисленные MUC5AC + бокаловидные клетки и участки муцина собирают листками
здоровых эпителиальных клеток конъюнктивы. Фигура 7 показано сравнение бокаловидных клеток конъюнктивы.
плотность между первой и второй группой на исходном уровне (первая группа: 14.1 ± 23.6 клетки/hpf, вторая группа:
18.0 ± 18.7 клетки/hpf) и через месяц после промывания глаз (первая группа: 15.3 ± 15.0 клетки/hpf, вторая группа:
18.5 ± 12.6 клетки/hpf). Достоверных различий как внутри подгруппы, так и в отношении
межподгрупповые вариации (Все Р > 0.05
Фигура 6. Репрезентативное окрашивание MUC5AC PAS. Обратите внимание на многочисленные MUC5AC. + бокаловидные клетки раньше
и после 1 месяц промывания глаз (черные стрелки): (А) базовый уровень в первой группе; (В) после 1 месяц в первой группе;
(С) базовый уровень во второй группе; а также (D) после 1 месяц во второй группе
Фигура 7. Подсчет бокаловидных клеток в периодной кислоте Шиффа (НЕТ) окрашивание. Обратите внимание на незначительные изменения в
подсчет бокаловидных клеток до и после 1 month of eyewash use (п > 0.05)
3. Обсуждение
в этом исследовании, мы обнаружили, что раствор для промывания глаз без консервантов не оказывает вредного воздействия на глаза.
поверхностные муцины, MUC5AC, и MUC16 и не вызывали повреждения эпителия.. Мы ранее
сообщили, что промывание глаз эффективно для удаления аллергии и инородных тел. [2]. более того,
это исследование показывает, что промывание глаз существенно не изменяет стабильность слез на поверхности глаза..
Ивашита и др.. сообщили, что в глазах, обработанных промывкой Eyebon®, наблюдалось значительно меньше флуоресцеина и лиссамина.
оценки зеленого окрашивания по сравнению с физиологическим раствором, содержащим БАК [3]. Их
Результаты показали, что БАК может усугубить глазные заболевания, такие как сухость глаз и поверхностный пунктат.
кератит (СПК). Следовательно, исследования секреции муцина и клеток, секретирующих муцин, могут предоставить бесценную информацию и открыть новые перспективы для лечения заболеваний глазной поверхности, включая сухость глаз.. Изменение экспрессии связанного с мембраной муцина и секреции гелеобразующего муцина бокаловидными клетками наблюдаются при заболеваниях поверхности глаза, включая синдром сухого глаза, что является распространенной и основной причиной посещения офтальмологических клиник.. Сообщается, что у 7,4–33,4% населения мира диагностирован синдром сухого глаза. (560 миллион до 2.54 миллиард пациентов) [10,11] Сухой глаз характеризуется потерей объема слезы., быстрый разрыв слезной пленки, и испарение слез. Предполагается, что TBUT является одним из основных объективных результатов диагностики синдрома сухого глаза., и это вызывает снижение зрительных характеристик и оптического качества. [11].
Из-за увеличения заболеваемости этим заболеванием в Азии, диагностические критерии синдрома сухого глаза были обновлены Азиатским обществом синдрома сухого глаза. [12].
Обновленные критерии подчеркивают важную роль оценки TBUT и определяют TBUT как наиболее важный объективный фенотип у пациентов с синдромом сухого глаза.. Хотя аномалия муцина является одной из причин снижения TBUT. (нестабильная слезная пленка) и является общим, его редко оценивают в рутинной клинической практике [9]. в этом исследовании, пациенты были относительно молодыми, и пациенты с синдромом сухого глаза были исключены. По данным Фарранда и др., Распространенность синдрома сухого глаза увеличивалась с возрастом и была выше среди женщин, чем среди мужчин. [13]. Следовательно, Возрастные и половые различия в отношении изменений поверхности глаза при промывании глаз должны быть выяснены в будущем.. Eyebon® содержит хондроитинсульфат натрия., который оказывает защитное действие на роговицу, и дикалий глицирризинат, который оказывает противовоспалительное действие. На животных моделях также было показано, что хондроитинсульфат натрия эффективен при лечении дефектов эпителия роговицы и язвенного кератита. [14].
Симадзаки-Ден и др.. сообщили, что уровни экспрессии MUC5AC в эпителии конъюнктивы были значительно ниже у пациентов с синдромом сухого глаза. [15]. Аргесо и др.. сообщили, что экспрессия MUC5AC была значительно ниже в слезной жидкости и эпителиальных клетках конъюнктивы у пациентов с синдромом Шегрена по сравнению с нормальными людьми. [16].
Эффекты использования растворов для промывания глаз на глазах с такими заболеваниями и низким уровнем экспрессии муцина должны быть изучены в ближайшее время.. Это может дать интересную информацию. Если микроокружение поверхности глаза у таких пациентов отличается от такового у здоровых людей, нельзя отрицать, что муцин уменьшен. Следовательно, в данном исследовании, мы намеревались в будущем изучать только здоровых людей, а затем пациентов с любыми глазными заболеваниями, Однако, в Японии есть этические соображения, и поэтому это вопрос будущего. Eyebon® добавляется в качестве регулятора pH, поскольку его можно настроить на тот же pH, что и слеза, чтобы предотвратить ощущение жжения.. Мы не можем отрицать возможность того, что такие вспомогательные вещества, как полисорбат, 80, л-ментол, и dl-камфора также может обладать активностью повреждения эпителия, такой как BAK., но мы не оценивали это в этом исследовании. таким образом, необходимы дальнейшие исследования для изучения того, могут ли нарушения эпителия роговицы быть вызваны вспомогательными веществами..
Это исследование не выявило существенных изменений в объективных оценках. (TBUT и окрашивание поверхности глаза) до и после промывания глаз, тогда как субъективная оценка (ДЭКС) значительно улучшилось после промывания глаз. Поскольку синдром сухого глаза диагностируется комбинация субъективных симптомов и снижение TBUT [12] в Японии, наши результаты показали, что вероятность обострения синдрома сухого глаза из-за промывания глаз может быть очень низкой., Однако, если показатель DEQS улучшится после промывания глаз, нельзя исключить возможность того, что может иметь место предвзятость, которая делает необработанный глаз более некомфортным.. таким образом, чтобы предоставить больше информации о слезной функции и изменениях поверхности глаза., мы также провели импрессионный цитологический анализ. Экспрессия MUC5AC и MUC16 не имела существенных изменений по сравнению с исходным уровнем и через месяц после начала промывания глаз.. В соотношении площадей, окрашенных антителами MUC16, к площадям эпителиальных клеток конъюнктивы, PAS-окрашивание отпечатков конъюнктивы, и MUC5AC плюс бокаловидные клетки, не было существенных различий между до и после промывания глаз. Ранее, мы сообщили, что экспрессия мРНК MUC5AC и плотность бокаловидных клеток показали резкое снижение у пациентов с атопией и тяжелым эпителиальным заболеванием. [17]. более того, было обнаружено множество положительных окрасок PAS на муцины в образцах импрессионной цитологии для глаз со значительным поражением эпителия и язвами роговицы.. В отличие, небокалоклеточные муцины (например, MUC1, 2, 4, а также 16) Экспрессия мРНК была значительно повышена в глазах со значительным эпителиальным заболеванием по сравнению со здоровыми контрольными глазами. [8]. Следовательно, эпителиальные клетки поверхности глаза могут секретировать другие муцины, чтобы компенсировать снижение MUC5AC и защитить поверхность глаза.. пусть окружающие свяжутся с врачом вместо вас, пока вы концентрируетесь на промывании глаз, важно оценить наличие или отсутствие нарушений эпителия роговицы перед началом промывания глаз., и в будущем мы будем исследовать муцины, отличные от MUC5AC и MUC16, а также эффективность промывания глаз у пациентов с атопическим дерматитом.
При лечении сезонного аллергического конъюнктивита (САК) и круглогодичный аллергический конъюнктивит (ПКК), местные антигистаминные препараты, стабилизаторы тучных клеток, нестероидные противовоспалительные препараты, и стероиды обычно используются, Однако, иногда мы сталкиваемся с пациентами, невосприимчивыми к этим лекарствам.. Хотя для облегчения симптомов пациента могут потребоваться дополнительные стероиды., они могут вызвать побочные эффекты, такие как катаракта, инфекционное заболевание, повышение внутриглазного давления, вызванное стероидами (ВГД), глаукома, атрофия кожи век, и депигментация с барьерными нарушениями [18–20]. Чтобы преодолеть эти проблемы, необходимы дополнительные или альтернативные терапевтические препараты. В последнее время, промывание глаз использовалось у пациентов с SAC или PAC.. В прошлом, мы сообщили, что противозудный эффект длился значительно до 20 минута после промывания глаз [2]. Мы считаем, что лечение промыванием глаз в основном эффективно при реакции ранней фазы, вызванной острым выбросом гистамина, поскольку оно содержит антигистаминный препарат., малеат хлорфенирамина. более того, Ожидается, что влияние промывания глаз на острые аллергические симптомы будет обусловлено механическим удалением аллергена с поверхности глаза путем промывания., Однако, после этого пациенты склонны тереть глаза. Поллиноз кожи век (пыльцевой дерматит или пыльцевой блефарит) Сообщалось, что прилипание пыльцы к тонкой и мягкой коже век легко вызывает кожную аллергию. [21,22]. Поскольку зуд возникает на коже век, а не на глазном яблоке, У таких пациентов закапывание глаз может быть не столь эффективным, как промывание глаз.. Таким пациентам может потребоваться лечение век. [23,24] растворы для промывания глаз могут быть одним из методов лечения или предотвращения зуда без каких-либо побочных реакций на лекарства.. Хотя это было месячное исследование, промывание глаз можно использовать в течение более длительного периода времени при лечении ПКК.. К тому же, из этого исследования были исключены пользователи контактных линз., но мы также должны изучить эффективность и безопасность промывания глаз у тех, кто носит контактные линзы.. Следовательно, нам следует рассмотреть возможность более обширного будущего исследования по этой теме. Результаты этого исследования показали, что использование раствора для промывания глаз без консервантов в течение одного месяца не оказывает вредного воздействия на слезную пленку и слизистые оболочки глазной поверхности..
4. Материалы и методы 4.1. Дизайн исследования и информация о пациенте Это исследование соответствовало принципам Хельсинкской декларации.. Все процедуры проведены в соответствии с протоколом. (#610) одобрено институциональным советом по этике Школы стоматологической медицины Университета Цуруми. Письменное информированное согласие было получено от всех пациентов.. Мы провели перспективное, контралатерально контролируемое исследование в поликлинике отделения офтальмологии, Университетская больница Цуруми. В общей сложности 42 глаза в 21 люди (17 мужчины, 4 женщины; средний возраст: 36.1 ± 7.4 лет) без глазной аллергии, сухие глаза, или другие глазные заболевания были проанализированы. Глаза были рандомизированы в группу промывания. (первая группа, п = 21) и группа последующего наблюдения, не требующая мытья (вторая группа, п = 21). Следующие элементы оценки на исходном этапе и после 1 месяца сравнивали для анализа вариаций внутри подгрупп и вариаций между подгруппами.; ДЭКС, слезная пленка НО, оценка окрашивания флуоресцеином, Экспрессия мРНК MUC5AC и MUC16 в конъюнктиве, Иммуногистохимия MUC16 для определения соотношения окрашенных площадей к общей площади захвата клеток., и окрашивание MUC5AC PAS для подсчета плотности бокаловидных клеток. (Таблица 1).
Пациенты, у которых наблюдалось хотя бы одно из следующих 11 проблемы были исключены. Пациенты с:
(1) аллергическая гиперчувствительность в анамнезе или известная гиперчувствительность к любому соединению или вспомогательному веществу Eyebon®,
(2) любое состояние глаз, которое может повлиять на их безопасность или параметры исследования (узкоугольная глаукома, требующая медикаментозного или лазерного лечения, клинически значимый блефарит, фолликулярный конъюнктивит, ирит, птеригий, или диагноз сухого глаза),
(3) история весеннего кератоконъюнктивита или атопического кератоконъюнктивита,
(4) хирургическое вмешательство на глазах в прошлом 3 за несколько месяцев до или рефракционной операции в прошлом 6 за несколько месяцев до учебы,
(5) наличие активной глазной инфекции (бактериальный, популярный, или грибковый) или преаурикулярная лимфаденопатия, или глазная герпетическая инфекция,
(6) любое неконтролируемое системное заболевание,
(7) астматический статус в анамнезе, персистирующая умеренная или тяжелая астма, или аллергические астматические реакции от умеренной до тяжелой степени на исследуемые аллергены,
(8) выраженные признаки или симптомы клинически активного аллергического конъюнктивита (определяется как наличие любого зуда или >1 гиперемия в ложе сосудов конъюнктивы) в любом глазу во время их первого визита. Пациенты, которые
(9) в настоящее время беременны, уход за больными, или планирование беременности,
(10) носить контактные линзы,
(11) использовали какие-либо лекарства (актуальный, местный офтальмологический, системный или инъекционный) в течение периода, указанного до и в течение периода исследования. В их число входил аспирин, аспирин, содержащий продукты, H1-антагонисты антигистаминные препараты (включая окуляр), и все другие противоаллергические методы лечения, которые включают рецепты, без рецепта, гомеопатические средства, все другие офтальмологические препараты местного применения (включая заменители слез) кроме учебных капель, кортикостероиды или стабилизаторы тучных клеток, и кортикостероиды депо.
9+—————————————————
4.2. Айбон®
Eyebon® — это коммерческий раствор для промывания глаз, используемый в экспериментах на животных и клинических исследованиях на людях., который можно использовать, до шести раз/день, на основе стандартов одобрения производства и маркетинга для безрецептурных препаратов. (внебиржевой) наркотики. Промывание должно происходить в течение ≤30 с на одно введение на основании сообщения о нарушениях эпителия роговицы. [1]. Во-первых, перед использованием вытирали косметику и потеки вокруг глаз. во-вторых, раствор был вылит, вплоть до 5 мл, в прилагаемую чашку для промывания глаз, и крепко прижал к глазу. Окончательно, прижимая чашку к глазу, пациент смотрит вверх, откинув голову назад, стараясь не пролить раствор, и глаз промылся несколькими морганиями. Существует много видов Eyebon®.; мы использовали «Витамин Eyebon® W». Раствор не содержит БАК., но следующие активные ингредиенты (в 100 мл): Дикалий глицирризинат 25 мг, малеат хлорфенирамина 3 мг, таурин 100 мг, пиридоксина гидрохлорид (витамин В6) 10 мг, цианокобаламин (витамин В12) 1 мг, и хондроитинсульфат натрия 10 мг. Также включены следующие вспомогательные вещества (в 100 мл): борная кислота, бура, полисорбат 80, эдетат натрия, пропиленгликоль, л-ментол, дл-камфора, и регулятор pH.
4.3. Анкета
Шкала DEQS представляет собой проверенный японский опросник, посвященный синдрому сухого глаза, который используется для оценки симптомов и их влияния на качество жизни. (качество жизни) у японцев [25]. DEQS состоит из 15 предметы, связанные с симптомами сухости глаз и влияющие на повседневную жизнь, а общая степень нарушения качества жизни рассчитывается как суммарный балл от 0 до 100 баллов..
4.4. Тесты слезной функции и окрашивание поверхности глаза
Мы оценили TBUT и показатели окрашивания флуоресцеином роговицы и конъюнктивы до и после исследования., как сообщалось ранее [26,27]. Показатель TBUT измерялся путем наблюдения за роговицей и конъюнктивой через щелевую лампу после закапывания раствора. 2 мкл раствора флуоресцеина в конъюнктивальный мешок. Измеряли время от нормального моргания до первого появления сухого пятна в слезной пленке.. Окрашивание поверхности глаза флуоресцеином проводилось с использованием барьерного фильтра, не содержащего синего цвета.. Поверхность глаза была разделена на следующие три зоны:: носовая бульбарная конъюнктива, роговица,
и височная бульбарная конъюнктива. Максимальная оценка окрашивания для каждой области составляла 3 точки, и максимальная оценка окрашивания для всей поверхности составляла 9 точки.
4.5. Конъюнктивальная импрессионная цитология
Образцы импрессионной цитологии были получены после местной анестезии с помощью 0.4% оксибупрокаин. Три отдельные полоски фильтровальной бумаги из ацетата целлюлозы. (Миллипор HAWP 304, Бедфорд, МА, США) замочить в дистиллированной воде на несколько часов и высушить при комнатной температуре. (25 ◦С) применялись на верхних височных, нижний височный, и нижняя носовая бульбарная конъюнктива. Эти области были аккуратно прижаты стеклянной палочкой, а затем удалены. (Фигура 8). Затем образцы фиксировали формальдегидом.. Int. Дж. Мол. Наука. 2019, 20, x ДЛЯ ЭКСПЕРТНОЙ РЕЦЕНЗИИ 9 из 12 4.5. Конъюнктивальный отпечаток
Цитология
Образцы импрессионной цитологии были получены после местной анестезии с помощью 0.4% оксибупрокаин. Три отдельные полоски фильтровальной бумаги из ацетата целлюлозы. (Миллипор HAWP 304, Бедфорд, МА, США) замочить в дистиллированной воде на несколько часов и высушить при комнатной температуре. (25 ° С) применялись на верхних височных, нижний височный, и нижняя носовая бульбарная конъюнктива. Эти области были аккуратно прижаты стеклянной палочкой, а затем удалены. (Фигура 8). Затем образцы фиксировали формальдегидом..
Образцы верхней височной бульбарной конъюнктивы были использованы для ПЦР MUC5AC и MUC16.. Образцы нижней височной бульбарной конъюнктивы были подвергнуты иммуногистохимическому окрашиванию для подтверждения присутствия MUC16.. Образцы нижней бульбарной конъюнктивы носа окрашивали PAS на MUC5A.
———————————————————————————-
Фигура 8. Области импрессионной цитологии:
(А) верхняя бульбарная конъюнктива для RT-PCR MUC5AC и MUC16,
(В) нижняя височная бульбарная конъюнктива для иммуногистохимии MUC16, а также
(С) нижняя носовая бульбарная конъюнктива для окраски MUC5AC PAS. 4.6. Количественная ПЦР в реальном времени для экспрессии мРНК MUC5AC и MUC16. РНК экстрагировали из образцов изогена.. qRT-PCR проводился в соответствии с инструкциями производителя. (Прикладные биосистемы, Вайтерштадт, Германия). кДНК (10 из) был усилен в 30 мкл конечного объема в присутствии 1.2 мкл олигонуклеотидов «Анализ по дизайну» (MUC5AC, MUC16 и GAPDH; Прикладные биосистемы). Наборы праймеров и зондов для тестовых генов были оптимизированы по концентрации., эффективность усиления, и точная коамплификация с праймером гена «экономка» и наборами зондов, последний, включая GAPDH. QRT-PCR был установлен в 96- луночные планшеты с использованием вышеуказанных реагентов и мастер-микса TaqMan, как указано в данных оптимизации, и его запускали на 7000 Термоциклеры ABI (Прикладные биосистемы). Термический профиль состоял из 50 °С для 2 мне, 95 °С для 2 мне, с последующим 40 циклы 95 °С для 15 секунд и 60 ° С 30 s. Данные в реальном времени были получены и проанализированы с использованием программного обеспечения системы обнаружения последовательностей. (Прикладные биосистемы) с ручной регулировкой базовых и пороговых параметров. Уровни экспрессии мРНК нормализовали по медиане экспрессии гена домашнего хозяйства. (ГАФДГ). Последовательности праймеров для ПЦР в реальном времени показаны в таблице. 2.
4.7. Иммуногистохимическое окрашивание на MUC16
Образцы импрессионной цитологии для иммуногистохимического окрашивания MUC16 помещали в пластиковые окончатые заливочные кассеты. (Муразуми, Осака, Япония). Затем их погружали в стеклянные банки, содержащие 10 мМ натрий-цитратного буфера (рН 6.0) и подверглись микроволновой обработке при 500 W для 5 минута для активации антигена. Затем образцы промывали в фосфатно-солевом буфере. (ПБС) дважды за 5 мне. Образцы помещали на предметные стекла и блокировали. 5 мл PBS с
2 капли лошадиного сывороточного альбумина для 20 мне. Первичные мышиные моноклональные антитела MUC16 в разведении 1:50 (ПРОГЕН Биотехник ГмбХ, Гейдельберг, Германия) были поданы заявки на 24 ч в комнате Рисунок 8. Области импрессионной цитологии: (А) верхняя бульбарная конъюнктива для RT-PCR MUC5AC и MUC16, (В) нижняя височная бульбарная конъюнктива для иммуногистохимии MUC16, а также (С) нижняя носовая бульбарная конъюнктива для окраски MUC5AC PAS. Образцы верхней височной бульбарной конъюнктивы были использованы для ПЦР MUC5AC и MUC16.. Образцы нижней височной бульбарной конъюнктивы были подвергнуты иммуногистохимическому окрашиванию для подтверждения присутствия MUC16.. Образцы нижней бульбарной конъюнктивы носа окрашивали PAS на MUC5AC., обезвоживаются в этаноле возрастающей концентрации, а затем в ксилоле., и наконец крышка соскользнула. 4.6. Количественная ПЦР в реальном времени для определения экспрессии мРНК MUC5AC и MUC16.
РНК экстрагировали из образцов изогена.. qRT-PCR проводился в соответствии с инструкциями производителя. (Прикладные биосистемы, Вайтерштадт, Германия). кДНК (10 из) был усилен в 30 мкл конечный объем в присутствии 1.2 мкл олигонуклеотидов «Анализ по дизайну» (MUC5AC, MUC16 и GAPDH; Прикладные биосистемы). Наборы праймеров и зондов для тестовых генов были оптимизированы по концентрации., эффективность усиления, и точная коамплификация с праймером гена «экономка» и наборами зондов, последний, включая GAPDH. QRT-PCR была организована в 96-луночных планшетах с использованием вышеуказанных реагентов и мастер-микса TaqMan и, как указано в данных оптимизации, и была проведена на 7000 Термоциклеры ABI (Прикладные биосистемы). Термический профиль состоял из 50 ◦С для 2 мне, 95 ◦С для 2 мне, с последующим 40 циклы 95 ◦С для 15 секунд и 60 ◦С 30 s. Данные в реальном времени были получены и проанализированы с использованием программного обеспечения системы обнаружения последовательностей. (Прикладные биосистемы) с ручной регулировкой базовых и пороговых параметров. Уровни экспрессии мРНК нормализовали по медиане экспрессии гена домашнего хозяйства. (ГАФДГ). Последовательности праймеров для ПЦР в реальном времени показаны в Таблице 2. ————————————————————– 4.7. Иммуногистохимическое окрашивание на MUC16
Образцы импрессионной цитологии для иммуногистохимического окрашивания MUC16 помещали в пластиковые окончатые заливочные кассеты. (Муразуми, Осака, Япония). Затем их погружали в стеклянные банки, содержащие 10 мМ натрий-цитратного буфера (рН 6.0) и подверглись микроволновой обработке при 500 W для 5 минута для активации антигена. Затем образцы промывали в фосфатно-солевом буфере. (ПБС) дважды за 5 мне. Образцы помещали на предметные стекла и блокировали. 5 мл PBS с 2 капли лошадиного сывороточного альбумина для 20 мне. Первичные мышиные моноклональные антитела MUC16 в разведении 1:50 (ПРОГЕН Биотехник ГмбХ, Гейдельберг, Германия) были поданы заявки на 24 ч при комнатной температуре (25 ◦С) во влажной камере, а затем предметные стекла промывали PBS. 3 раз для 5 мне. Образцы были обработаны с использованием набора VECTASTAIN ABC Kit. (ДАКО, Ко, Карпинтерия, Калифорния, США) протокол (3,30 Окрашивание диаминобензидинпероксидом). Вкратце, образцы были разработаны с 0.025% 3,30 диаминобензидин (Сигма Кемикал, Ко, ул.. Луи, МО, США) смешанный с 0.3% H2O2, и докрашены гематоксилином. Обезвоживание погружением в последовательно более концентрированные растворы этилового спирта., с последующим погружением в ксилол на ночь. Окончательно, образцы переносили в стеклянные флаконы и накрывали покровной средой для светового микроскопического исследования.. Оценку образцов под световой микроскопией на наличие положительной иммуногистохимической окраски также проводили маскированным способом.
4.8. MUC5AC Периодическая кислота Шиффа (НЕТ) Окрашивание для определения плотности бокаловидных клеток
Количественные исследования бокаловидных клеток конъюнктивы проводили путем фотографирования с помощью калиброванной сетки под световым микроскопом при увеличении 400×.. Мы сфотографировали три непересекающиеся области каждого образца, выбранного случайным образом, и усреднили результаты для оценки одного образца.. Плотность бокаловидных клеток определяли как количество клеток в поле зрения при большом увеличении. (ГХ/ФВЧ). Тот же исследователь, с которым были взяты образцы, оценивал образцы на количество бокаловидных клеток и содержание муцина.. 4.9. Статистический анализ
Данные были проанализированы с помощью программного обеспечения Prism. (версия. 8.1.0 для Mac; GraphPad Software Inc., Сан Диего, Калифорния, США) и Excel для Mac (версия. 16.16.11; Корпорация Майкрософт, Редмонд, Вашингтон, США). Сравнить различия клинических глазных параметров между группами., использовался парный t-критерий. Все данные были выражены как среднее ± стандартное отклонение. (СД). P-значение < 0.05 считалось, что это указывает на статистическую значимость.
Вклад автора: доктор медицинских наук. и Х.Ф.. задумал и спланировал эксперименты; доктор медицинских наук, КАК., и Х.Ф.. проводил эксперименты; Х.Й., Н.К., доктор медицинских наук, и Х.Ф.. проанализировали результаты; Х.Й.. и доктор медицинских наук. написал рукопись; все авторы прочитали и одобрили окончательную рукопись.
Финансирование: Это исследование было спонсировано и профинансировано компанией Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd. — Спонсор не играл никакой роли в разработке исследования.; в коллекции, анализы, или интерпретация данных; при написании рукописи, или в решении опубликовать результаты.
Благодарности: Авторы благодарят компанию Editage за англоязычное редактирование..
Конфликт интересов: Х.Й., Н.К., и в качестве. не имел конфликта интересов, о котором можно было бы заявить, связанного с этой рукописью; доктор медицинских наук. и Х.Ф.. получил гонорар от фармацевтической компании Кобаяши., Ltd. и Otsuka Pharmaceutical Co.,
ООО, но не связано с согласием на текущее исследование; Х.Ф.. получил гонорар от фармацевтической компании «Сантэн»., ООО, Фармацевтическая компания Сенджу., ООО, Уайт Медикал Ко., ООО, Регенерон Фармасьютикалс Инк., Аллерган, и лаборатории Алкон, Инк., но не связано с согласием на текущее исследование. Сокращения
Оценка качества жизни DEQS, связанная с синдромом сухого глаза
PAC круглогодичный аллергический конъюнктивит
САК сезонный аллергический конъюнктивит
БАК бензалкония хлорид
ВГД внутриглазное давление
TBUT время разрыва слезной пленки
PAS периодическая кислота Шиффа
использованная литература
1. Ватанабэ, К. Влияние промывания глаз на эпителий роговицы. Фолиа Офтальмол. Япония. 2000, 51, 32–36.
2. Сейчас, ЧАС.; истинный, М.; Мацумото, Ю.; Фудзисима, ЧАС. Эффективность и безопасность раствора для промывания глаз при аллергическом конъюнктивите после заражения конъюнктивы аллергеном. Анна. Аллергия Астма Иммунол. 2016, 117, 565–566. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
3. Ивашита, М.; истинный, М.; Яно, ЧАС.; Санто, Ю.; Нодзаки, М.; Фудзисима, ЧАС. Эффект раствора для промывания глаз (Коммерческий моющий раствор) на эпителии роговицы: Побочные эффекты бензалкония хлорида на поверхность глаза. Дж. Клин. Опыт. Офтальмол. 2016, 7, 751. [Перекрестная ссылка]
4. Такамура, Э.; Утио, Э.; Эбихара, Н.; О, нет, С.; Охаси, Ю.; Окамото, С.; Кумагай, Н.; ставка, Ю.; Сёдзи, Дж.; Накагава, Ю.; и другие. Японские рекомендации по аллергическим заболеваниям конъюнктивы 2017. Аллергол. Int. 2017, 66, 220–229. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
5. Гипсон, И.К.. Бокаловидные клетки конъюнктивы: Обзор последних результатов. Прога. Retin Eye Res.. 2016, 54, 49–63. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
6. Что, Да. Секретируемые муцины на поверхности глаза. Расследовать. Офтальмол. Вис. Наука. 2018, 59, ДЕС151 – ДЕС156. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
7. Блэлок, Т.Д.; Сперр-Мишо, С.Дж.; Тисдейл, КАК.; Хеймер, С.Р.; Гилмор, РС.; Рамеш, В.; Гипсон, И.К.. Функции MUC16 в эпителиальных клетках роговицы. Расследовать. Офтальмол. Вис. Наука. 2007, 48, 4509–4518. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
8. истинный, М.; Мацумото, Ю.; Окада, Н.; Игараси, А.; Фукагава, К.; Симадзаки, Дж.; Цубота, К.; Фудзисима, ЧАС. Изменения эпителия поверхности глаза MUC16 и бокаловидных клеток MUC5AC у пациентов с атопическим кератоконъюнктивитом. Аллергия 2008, 63, 1324–1334. [Перекрестная ссылка]
9. Бодуэн, С.; Роландо, М.; Бенитес Дель Кастильо, Дж.М.; Мессмер, ЭМ.; Фигейредо, ФК; ирландский, М.; Ван Сеттен, Г.; Лабетуль, М. Переосмысление центральной роли муцинов при синдроме сухого глаза и заболеваниях глазной поверхности. Прога. сетчатка. Разрешение глаз. 2019, 71, 68–87. [Перекрестная ссылка]
10. Альшамрани, А.А.; Альмуса, КАК.; Всемогущий, А.А.; Алафалек, А.А.; Алосаими, М.Б.; Алькахтани, ЯВЛЯЮСЬ.; Альмульхем, ЯВЛЯЮСЬ.; Альшамрани, М.А.; Все в порядке, А.Х.; Алькахтани, И.З.; и другие. Распространенность и факторы риска симптомов сухого глаза среди населения Саудовской Аравии. Ближний Восток, Африка. Дж. Офтальмол. 2017, 24, 67–73. [Перекрестная ссылка]
11. Уиллкокс, М.Д.П.; Аргесо, П.; Георгиев, Г.А.; Холопайнен, Дж.М.; Лори, Г.В.; Миллар, Ти Джей; Папас, Э.Б.; Роллан, Дж.П.; Шмидт, Т.А.; Шталь, У.; и другие. Отчет о слезоточивой пленке TFOS DEWS II. шок. серфинг. 2017, 15, 366–403. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
12. Цубота, К.; Ёкои, Н.; Симадзаки, Дж.; Ватанабэ, ЧАС.; истинный, М.; Ямада, М.; Киношита, С.; Ким, Х.М.; Чаа, Х.В.; Хён, Дж.Й.; и другие. Новые взгляды на определение и диагностику синдрома сухого глаза: Консенсусный отчет Азиатского общества синдрома сухого глаза. шок. серфинг. 2017, 15, 65–76. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
13. Фарранд, К.Ф.; Fridman, М.; Стиллман, И.О.; Шаумберг, Д.А.. Распространенность диагностированной болезни «сухого глаза» в США среди взрослых пожилого возраста 18 Годы и старше. Являюсь. Дж. Офтальмол. 2017, 182, 90–98. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
14. Ледбеттер, Э.К.; Мангер, Р.Дж.; Кольцо, Р.Д.; Скарлетт, Дж.М.. Эффективность двух офтальмологических растворов хондроитинсульфата в терапии спонтанных хронических дефектов эпителия роговицы и язвенного кератита, связанного с буллезной кератопатией у собак. Ветеринар. Офтальмол. 2006, 9, 77–87. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
15. Симадзаки-Дэн, С.; истинный, М.; Лечь, К.; Симадзаки, Дж. Симптомы, зрительная функция, и муциновое выражение глаз с нестабильностью слезной пленки. Роговица 2013, 32, 1211–1218. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
16. Аргесо, П.; Баларам, М.; Сперр-Мишо, С.; Койтманн, Х.Т.; Дана, МИСТЕР.; Гипсон, И.К.. Снижение уровня муцина бокаловидных клеток MUC5AC в слезах пациентов с синдромом Шегрена.. Расследовать. Офтальмол. Вис. Наука. 2002, 43, 1004–1011.
17. истинный, М.; Асано-Като, Н.; Танака, М.; Игараси, А.; Шиммура, С.; Симадзаки, Дж.; Окада, Н.; Такано, Ю.; Фукагава, К.; Цубота, К.; и другие. Изменения поверхности глаза и MUC5AC у пациентов с атопией и щитовидными язвами роговицы. Карр. Разрешение глаз. 2005, 30, 897–908. [Перекрестная ссылка]
18. Чен, НИ СЛОВА.; Эпплбаум, Д.С.; Солнце, Г.С.; Вспахать поля, СК. Атопический кератоконъюнктивит: Обзор. Дж. Являюсь. Акад.. Дерматол. 2014, 70, 569–575. [Перекрестная ссылка]
19. Аль-Ханаине, В.; Хасанейн, Д.Х.; Абдельбаки, С.Х.; Эль-Завари, О.М.. Стероид-индуцированная глазная гипертензия в детской возрастной группе. Евро. Дж. Офтальмол. 2018, 28, 372–377. [Перекрестная ссылка] Int. Дж. Мол. Наука. 2019, 20, 5078 12 из 12
20. Кольбе, Л.; Клигман, ЯВЛЯЮСЬ.; Шрайнер, В.; Стадемайер, T. Вызванная кортикостероидами атрофия и нарушение барьерного барьера, измеренные неинвазивными методами на коже человека. Разрешение кожи. Технол. 2001, 7, 73–77. [Перекрестная ссылка]
21. Нагата, Ю.; Ёсихиса, Ю.; Мацунага, К.; Рехман, М.Ю.; Китаичи, Н.; Симидзу, T. Роль фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (МИФ) при пыльцевом аллергическом конъюнктивите и пыльцевом дерматите у мышей. ПЛОС ОДИН 2015, 10, e0115593. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
22. Ёкодзеки, ЧАС.; Такаяма, К.; Катаяма, Я.; Нисиока, К. Пыльца японского кедра как фактор обострения атопического дерматита: Результаты атопического теста и гистологического исследования. Акта Дерм. Венереол. 2006, 86, 148–151. [ПабМед]
23. Асаи, T. Клинические особенности и профилактика дерматита век, вызванного кедровой пыльцой, у больных атопическим дерматитом. Разрешение кожи. Технол. 2008, 7, 62–66.
24. Ёкодзеки, ЧАС. Чрескожная сенсибилизация и аллергия: Патология и лечение дерматитов путем чрескожной сенсибилизации пыльцой кедра. Клин. Иммунол. Аллергол. 2013, 59, 591–597.
25. Оттуда, Ю.; Ямагучи, М.; Ёкои, Н.; Учино, М.; истинный, М.; Оиси, Т.; Охаси, Ю.; Охаси, Да. Разработка и валидация опросника для оценки качества жизни, связанного с синдромом сухого глаза. JAMA Офтальмол. 2013, 131, 1331–1338. [Перекрестная ссылка] [ПабМед]
26. Оттуда, Ю.; Ямагучи, М.; Сираиси, А. Ретроспективное наблюдательное исследование влияния офтальмологической суспензии ребамипида на качество жизни пациентов с синдромом сухого глаза. Дж. Офтальмол. 2019, 2019, 8145731. [Перекрестная ссылка]
27. Учино, Ю.; Учино, М.; Ёкои, Н.; истинный, М.; Кавасима, М.; Окада, Н.; Инаба, Т.; Тамаки, С.; Комуро, А.; Сономура, Ю.; и другие. Изменение муцина слезы 5AC у офисных работников при использовании терминалов с визуальным дисплеем: Исследование в Осаке. JAMA Офтальмол. 2014, 132, 985–992. [Перекрестная ссылка]